苦皮藤内生真菌农用活性成分的研讨.pdfVIP

摘 要 本论文以一株编号为2B的苦皮藤内生真菌为出发菌株，应用形态学的方法鉴定了 其种属地位;研究了其代谢产物的农用生物活性，并对目标活性物质进行分离和结构解 析，采取诱变育种手段选育了高产菌株，并对高产菌株的发酵条件进行了优化。通过试 验结果的分析和讨论，取得了以下结论: 1根据真菌的分类及鉴定方法，用光学显微镜观察2B菌株气生菌丝、大型分生抱 子、小型分生抱子及菌落性状，对比相关分类系统，将 2B菌株鉴定为层出镰刀菌 (Fusariumprolfieratum)a 2在对2B菌株发酵产物生物活性研究中，发现213菌株发酵产物甲醇提取物有明 显的抑菌活性，在1000Pg-mL1浓度下对番茄早疫病菌(Alternariasolani)、烟草赤星 病菌 (Alternariaalternata)、小麦根腐病菌 (Bipolarissorokiniana)、玉米大斑病菌 (Exserohilumturcicum)4种供试菌的菌丝生长和抱子萌发抑制率均大于80%;在盆栽 试验中，对黄瓜霜霉病菌(Pseudoperonosporacubensis)的治疗和保护作用均在70%以 _匕。 3采用常压柱层析、HPLC制备等方法，在生物活性追踪指引下，从2B菌株发酵 产物分离出4个化合物2B-1,2B-2,2B-3,2B-4。经波谱技术(IR,HNMR,CNMR, COSY,MS)，结合化学检验方法，并与相关文献对比，将分离得到的化合物分别鉴定 为enniatinB,enniatinBi,enniatinA,,ergosterin。化合物2B-1，2B-2,2B-3在100}LgmL-l 浓度下，对玉米大斑病原菌菌丝生长抑制率分别为68.18%,87.49%,90.91%0 4建立了恩镰抱菌素 (enniatins)的HPLC检测方法。检测条件为色谱柱 (C18柱， 0.9x30cm,10}tm);流动相(V:V)甲醇 :水(88:12):流速 1mLminI;检测波长 UV229nm;室温下5pL进样，该方法相对标准偏差RSD1%，平均回收率在98%以上。 5采用紫外线 (UV)，甲基磺酸乙醋 (EMS)，超声波+UV十EMS3种诱变方式进 行复合诱变，同时结合形态变异与产量之间的相关关系，挑选形态差异明显的单菌落， 然后通过摇瓶发酵筛选enniatins高产菌株，通过3轮诱变筛选大幅度提高了菌种的生 产能力，最后得到的突变株UE152代谢enniatinns总产量为59.72mg-l00mLl，是出发 菌株摇瓶效价2.9倍，且该突变株的高产遗传特性稳定。 6通过单因子试验和多因子正交试验筛选获得UE152菌株最佳的摇瓶培养基配方 和发酵条件为葡萄糖2%、土豆20%、蛋白陈0.5%,NH4C10.3%,MgS040.1%和CaC03 0.1%，培养温度260C，接种量10块菌饼 (每50mL发酵液)，初始pH值为6.0-7.0, 装液量50mL(每250mL三角瓶)，转速160rpm，发酵时间120h。在上述实验条件下 enniatinns总产量可达88.68mg-l00mL1，从正交试验结果分析当中看出，如果适当增加 通气量，产量可望更高。 关键字:内生真菌 活性成分 结构鉴定 菌株选育 发酵条件 StudiesonAgriculturalBioactivityComponentsofEndophytic FungusinCelastrusa Abstract Endophyticfungusofstrain2BisolatedfromCelastrusangulatushasbeenstudiedonthetaxonomy, agriculturalbioactivities,isolationnadidentificationofactivecomponents,breedingofhighyieldstrains, andoptimizationoffermentationconditionsinthispaper.Themainresultsareasfollows: 1 Bymenasofobservationofaerialmycelium,macroconidia,microconidianadcolonymorphology characteristicsofs