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肝损伤动物模型的建立方法及分子机制的研究进展 许竟辉，邝少松，谭巧燕，黄家朝 (广东省医学实验动物中心，广州510055) 【摘要】肝脏是人体内最大的实质器官结构和功能复杂，易受多种病原体、毒物及免疫病理累及。急性肝 衰竭(ALF)病程凶险病死率极高，慢性肝病则是困绕众多患者的常见多发病。实验性肝损伤动物模型是实验和临 床假说的基础，它的建立为探知肝脏疾病的病因、病理生理、疗效判断、疫苗开发提供有用的工具。 【关键词l肝功能衰竭；肝损伤；肝硬化；动物模型：中毒 实验性肝损伤动物模型是实验和临床假说的基础，它的建立为探知肝脏疾病的病因、病理生理、疗效判断、 疫苗开发提供有用的工具。实验性肝损伤动物模型建立的方法较多，本文就已建立的方法及其相关分子机制综述 如下． 1 药物中毒性肝损伤实验动物模型 肝细胞对许多毒物敏感，通过毒物对实验动物造成不同程度、不同性质的肝损伤模型是最常 用的方法。 1．1 四氯化碳(c曩rhntetochloride，ccL) 经肝内的CYW2E1代谢生成氧化活性中间产物(ROI)造成生物膜结构和功能损伤，表现为肝 小叶中央区肝细胞坏死脂变、反应性增生，脂质的过氧化反应可促进肝纤维化，急性损伤小叶中 央区见气球样变，DNA片段及巨噬细胞提示细胞凋亡参与肝损伤中llJ。机制为：CCl4的活性 代谢产物三氯甲基根(一CCl3)刺激产生活性中间产物(ROI)，造成脂质过氧化，引起细胞损害， 结缔组织产生过多。诱导微粒体细胞色素P450同工酶活性的物质可增加CCl4产物的肝毒性， 因此在制模过程中加人戊巴比妥或乙醇代替饮水是加速肝损伤进程的常用方法。肝纤维化模型： 纤维化模型有人肝硬化多数特征。肝纤维化进展稳定、重复性好，是研究肝纤维化发展动态最常 用的方法。诱发的ALF模型则很少出现肝性腑病表现。但是对相同的四氯化碳处理的反应中， 不同动物出现肝细胞坏死和纤维化的程度差异较大，而导致不一致的组织学和病理生理学表现， 而且四氯化碳肝毒作用迅速、剧烈，动物死亡多。 1．2 D-半乳糖胺(D-galactosamine，D-GaIN) 半乳糖胺是一种肝细胞毒性药物，可在短时间内引起严重肝损害，其作用机制是：①通过 抑制肝细胞的RNA和浆膜蛋白合成造成肝细胞坏死12l；②肝细胞坏死与细胞外Ca2+大量进人 细胞内有关[31；③一些研究指出，肠外因素，包括胃肠通透性增加，细菌的移位和内毒素等都 增加了半乳糖胺的肝脏毒性。D．GaIN对大、小鼠易感，大龄动物较敏感。D-GaIN诱发肝损伤有 剂量依赖。给药方式有皮下、腹腔内和静脉注射。肝纤维化模型：5-6个月成模，似小结节性肝 炎后性肝纤维化。ALF模型：大剂量24h内注射，单剂4--6h出现个别肝细胞变性坏死，6h后有 Kuppfer细胞增多，24h后出现多灶性坏死伴炎性反应，48h后损伤达高峰门管区水肿炎性细胞浸 润，48h后开始重建结构，p12d完全恢复141。病理改变与病毒性肝炎相似。长期小剂量可导致肝 纤维化和肝癌，ALF模型症状、生化、组织学表现接近人，重复性好对肝衰竭、肝性脑病、人工 545 第七届中南地区实验动物科技交流会论文汇编 动物模型 肝支持系统的评价研究有重要价值。缺点为半乳糖胺较昂贵。 1．3 对乙酰氨基酚(acetaminophen，PAPA) PAPA是一种肝毒物，是经生物转化后形成亲电子代谢物致肝损伤的样板，PAPA常用于制 作急性肝功能衰竭模型，P450诱导剂加重肝损伤，先予以P450诱导剂和GSH合成酶抑制剂， 再予PAPA复制的兔急性肝功能衰竭模型与人急性肝功能衰竭临床特点，组织学表现相似，是较 理想的急性肝功能衰竭模型。多种系动物敏感，表现为小叶中央区肝细胞的坏死，PAPA诱导肝 损伤程度与IL．10的表达水平呈负相关，与巨噬细胞移动限制因子呈正相关，提示涉及炎症因子 体能减轻损伤表明有免疫病理参与pJ。 1．4 甲基亚硝胺(dimethylnitrosamine，DMN) DMN是常见的致肝癌剂，它通过微粒体代谢，其中间产物与细胞核酸、蛋白质等结合致肝 损伤，同时产生一种活性甲基化产物使核酸、蛋白质甲基化导致肝坏死161。多数种系易感有肾毒 性。急性效应为腺泡3区的坏死和脂变，