人IL-18基因克隆及表达.pdfVIP

ChinJCliniHepatol，August2009，Vo1．25，No．4 人 IL一18基因克隆及表达 李曼妮 ，苏先狮 ，杨春艳 (1．广东省公安边防总队医院二内科，广东深圳 518029；2．中南大学湘雅二医院肝病研究中心，湖南长 沙410011) 【摘要】目的 克隆人IL一18编码区eDNA，研究其在大肠杆菌中的表达。方法 应用RT—PCR方法从人 外周血单个核细胞 (PBMC)中扩增出成熟 (hIL—l8)eDNA。利用基因重组技术构建 IL—l8的原核重组表达 质粒pGEX一3X—hIL一18，转化E．coliJM。，以IPTG诱导培养，收集菌体直接进行SDS—PAGE分析。结果 经测序证实获得人IL—l8的eDNA序列与文献报道的eDNA完全一致；携此重组质粒pGEX一3X—hIL一18的大 肠杆菌经 IPTG诱导，表达了分子量为43kD的重组融合蛋白。结论 克隆了人 IL一18eDNA，利用大肠杆菌成功 地表达了重组蛋白。为进一步探讨人 IL一18的生物学作用及可能的临床应用打下基础。 【关键词】PBMC；IL一18；RT～PCR；基因克隆；重组表达 【中图分类号】Q73 【文献标识码】A 【文章编号】1001—5256(2009)04—0264—03 Cloningofmaturehumanlnterleukim 一18Genesfrom humanPBM C．ExpressionoftheProteinintlleE．coli L／Man—niSUXian—shiYANGChun—yan(GuangdongMunicipalcb HospitaloftheChinesePeoplesArmedPolcie Forces，ShenzhenGuangdong，518029，China．) Abstract：Objective Toclonematurehumaninterleukim一18cDNAandexpressitbyE．coliJM109．Methods The eDNAencodingmaturehumanimterleukim 一18wasamplifiedfrom totalRNA ofhumanperipheralbloodmonooonuclear cells(PBMC)byRT—PCR．ThehIL一18reconbinantpmka~oticexpressionplasmidwasconstructedbycloningthiscD- NA fragmentintopGEX一3X，andtransform therecombinantplasmidintothecompetentcellsofE．coliJM109．Th ere— combinantIL～18protein’ sexpressionwasinducedbyIPTG，theresultwasanalysedbySDS—PAGE ．Results Se· quenceanalysisindicatedthatthiseDNA is100％ homologttothepublishedhlL一18cDNA sequence；Therecombinant plasmidpGEX一3X—hlL一18wasconstructedsuccessfully；ByinductionofIPTG，theE．coliJM109harbouringthere— combinantplasmid(pGEX一3X—hIL一18)expressedrecombinantfusionprotein(rhlL一18一GST)withmolecular weight43KD．Conclusion WehaveclonedhumanIL一18eDNA andexpresseditbyE．coliJM 109． Itisthebasisfor thestudyonbiologicalrolesofhumanIL一18andofrpossibleapplication inclinicinthefuture． Keywords：PBM