试验研究-现代生物医学进展.PDFVIP

4054 · · 现代生物医学进展 Progress in Modern Biomedicine Vol.11 NO.21 NOV.2011 ·实验研究 · 复合探针荧光定量 PCR 法检测布鲁 氏菌的实验研究 * 吴忠华 吕沁风 郑 伟 李 禾 （浙江 国际旅行卫生保健 中心 浙江 杭州 310003） 摘要 目的：建立用复合探针荧光定量 PCR 快速检测布鲁 氏菌的方法。方法：研究根据 BSCP31 基因编码 31KDa 的布鲁 氏杆菌表 面蛋白的核苷酸序列设计特异引物，通过 PCR 法的特异性、灵敏度和重复性研究，建立 了复合探针荧光定量 PCR 检测布鲁 氏菌 的方法，用于布鲁 氏菌病 的筛选和诊断。结果：结果表明该检测方法的特异性为 100%，最低可检出 10 个拷贝 的质粒 DNA 分子， 1 6 2 可对 1×10 -1×10 拷贝范围 内的模板进行定量，最低可检测至 1×10 CFU/ml 细菌。该方法的精密度好，阳性质控品和 阴性质控 品不同时间测定三次及同一时间五次重复实验结果 CV 值均小于 5%。结论 ：本研究建立 的复合探针实时荧光定量 PCR 检测布 鲁 氏杆菌的方法，可对布鲁 氏病原菌进行快速检测，对布病 的筛选和确诊具有重要意义。 关键词：复合探针 ；荧光定量 PCR ；布鲁 氏杆菌 R446 R378.5 A 1673-6273 2011 21-4054-04 中图分类号 ： ， 文献标识码： 文章编号： （ ） Experimental Research on Brucella Bacteria Detection by Fluorescent Quantitative PCR with Composite Probe* WU Zhong -hua, LV Qin -feng, ZHENG Wei, LI He (International Travel Healthcare Center Zhej iang, Hangzhou 310003 China) ， ABSTRACT Obj ective: To establish a composite probe fluorescent quantitative PCR assay for Brucella detection. Methods: BSCP31 gene nucleotide sequences specific for 31KDa surface protein of Brucella was used for the PCR primers design. According to the specificity, sensitivity and reproducibility of primers, a composite probe fluorescent quantitative PCR assay for Brucella detection was established for screening and diagnosis of Brucella disease. Results: The specificity of composite probe fluorescent quantitative PCR as- say was 100%. The assay can detect the minimum 10 copies of plasmid DNA molecules. Accurate quantization can be achieved with