微生物学实验104P.ppt

3.实验方法和步骤 （1）玻璃器皿的准备 培养皿的包装、移液管的包装 、棉塞的制作 、稀释水的配制 （2）培养基的配制 牛肉膏蛋白胨培养基的配方：牛肉膏0.3g，蛋白胨1g，NaCl0.5g，琼脂2.0g，水100ml，pH 7.2-7.4。 灭菌条件：121℃，15－20min。 称量、加热溶解 、调节pH 、 分装、加棉塞、斜面 、灭菌 思考题 ②了解加压蒸汽灭菌的原理和方法。 ①配制培养基的基本步骤有哪些?应注意什么问题? 实验七 微生物直接计数法（血球计数板） 一、目的要求 二、基本原理： 此法是利用血球计数板在显微镜下直接进行测定。它观察在一定的容积中的微生物的个体数目，然后推算出含菌数，包括死活细胞均被计算在内，还有微小杂物也被计算在内。 这样得出结果往往偏高。这种方法常用于形态个体较大的菌体或孢子。 计数板是一块特制的厚玻璃片，玻片上有四个槽构成三个平台，中央平台又由一短槽隔成两半，其上各刻有一小方格网，每个方格网共分九个大格，中央的一大格作为计数用，称为计数室。 计数室刻度有2种：一种是25中格X16小格，而另一种为16中格X25小格，它们都是由400个小格组成。每个大方格边长为1mm，则每个大方格面积为1X1=1mm2。盖上盖玻片后，载玻片与盖玻片之间高度为0.1mm,所以每个计数室的体积为0.1 X 1 X 1=0.1mm3,每个大格有400个小格，所以每个小方格体积为0.1/400=1/4000mm3=1/4000,000ml。 * * * * # # # # # 三、材料与仪器： 1、待测样品：酵母菌悬液 2、显微镜，血球计数板，接种环,盖玻片等。 四、方法与步骤: 1、取洁净的血球计数板，在计数室上面盖上盖玻片。 2、取稀释到一定程度（5~10个酵母/小格）酵母液，从盖片边缘滴一小滴，使菌液自行渗入，计数室内不能有气泡。先在低倍镜下找到小方格网后，再转换高倍镜观察并计数。3、如用16 X 25计数板，只计四个角上中方格的菌数。若是25 X 16的计数板，除计数四个角上的中格菌数外，还要计算中央中格的菌数。每个样品重复计数2~3次。计数时应不时调节焦距，才能观察到不同深度的菌体。 4、位于格线上的酵母菌一般只计此格的上方线及左方线上的菌体。 5、计数方法： 样品中菌数/ml=每小格平均菌数 x 4000 ,000x 稀释倍数，本实验采用25 x 16规格，要求数这些方格中的全部小格即80个小格。 设：每个中方格的菌数为A，则 每小格平均菌数=（A1+A2+A3+A4+A5)/80 A1+A2+A3+A4+A5 样品中的菌数/ml= X 4000,000 X 稀释倍数 80 结果记录： 微生物名称 总菌数 个/ml 第一个 中格 第二个 中格 第三个 中格 第四个 中格 第五个 中格 第一次 测定 第二次 测定 平均 四、测定注意事项: 1、测定时，酵母菌液要摇匀，防止酵母凝聚沉淀。 2、活酵母有芽殖现象，若芽体达到母细胞大小的一半时，即可作为两个菌体计数，若芽体小于母细胞一半时为1个酵母细胞。 3、位于格线上的酵母菌一般只计此格的上方线及左方线上的菌体。 五、思考题： 1、用血球计数板计数时，哪些步骤易造成误差？ 2、血球计数板测定原理是什么？它有哪些优点？ 实验八、化学药物对微生物的作用 一、实验目的： 了解抗生素对微生物的杀灭作用。 二、实验原理： 抗生素等 化学药物对微生物具有抑制或杀灭作用。因此在实际生活中常用化学药物进行杀菌。不同种类的化学物质对微生物的杀菌能力不一样，作用条件也有差别，其效果也不同，在使用时需要灵活选择。 三、实验器材： 1.活材料：大肠杆菌、枯草杆菌斜面菌种。 2.培养基及试剂：牛肉膏蛋白胨培养基、HgCl2、庆大霉素和青霉素。 关键点： 严格掌握乙醇脱色程度，如脱色过度，则阳性菌被误染为阴性菌；而脱色不够时，阴性菌被误染为阳性菌。 菌龄也影响染色结果，如阳性菌培养时间很长，或已死亡及部分自行溶解了，都常呈阴性反应。 五、实验内容 1.对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡 萄球菌分别进行革兰氏染色。 2.对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌混合涂片进 行革兰氏染色。 大肠杆菌（G-） 枯草芽孢杆菌（G+） 金黄色葡萄球菌与大肠杆菌 六、实验思考题 1.绘出大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄 球菌的形态图，注明放大倍数及颜色。 2.为什么革兰氏染色