感染肺炎支原体绵羊外周血单核细胞细胞因子和ISG15 mRNA表达水平动态观察.pdfVIP

畜牧与兽医2014年第46卷第1期 ·63· 感染肺炎支原体绵羊外周血单核细胞细胞因子和 ISGl5 mRNA表达水平动态观察 姜方配，沈文，鲁海富，杨文，孙延鸣+ (石河子大学动物科技学院，新疆石河子832000) PCR方法检测了18只经人工感 摘要：探讨绵羊感染肺炎支原体后相关细胞因子和干扰素刺激因子15(ISGl5)的变化及其意义。应用ReaI-time mRNA的表达水平。结果：在感染后的第7天与第14 染肺炎支原体的巴什拜羔羊和盘羊杂交羔羊的外周血单核细胞中IFN一¨IL一12和ISGl5 作用，对研究支原体肺炎发病机理及提供免疫治疗有指导意义。 关键词：绵羊；肺炎支原体；IFN一1；IL一12；干扰素刺激基因15(ISGl5) 中图分类号：$858．26 文献标志码：A 文章编号：0529-5130(2014)01-0053一04 PremixExzaqTM、Prime 羊支原体性肺炎，又称羊传染性胸膜肺炎，是由 购自Invitrogen公司；SYBR RT 支原体(包括丝状支原体山羊亚种和绵羊肺炎支原 Scriptreagent 体)所引起的一种高度接触性传染病，其临床特征 为高热，咳嗽，胸和胸膜发生浆液性和纤维素性炎 荧光定量PCR仪购自北京吉泰生物科技有限公司。 症，取急性和慢性经过，死亡率很高。该病常呈地方 1．2试验羊分组及感染 流行性，主要借助空气一飞沫经呼吸道传染。肺炎支 将试验羊分为A、B、C3组，每组6只，A组 原体经飞沫传播进入血液可形成支原体血症，进而侵 为盘羊杂交羊，B、c组为巴什拜羊。A、B组按参 犯全身器官产生相应并发症，并引起免疫功能异常， 考文献[5]的方法人工感染绵羊肺炎支原体2mL， 其确切机理尚需探讨¨j。先前的研究表明IFN一^y、IL浓度为106 CCU／mL，气管内注射；c组为对照，气 —12和干扰素刺激因子15(interferon—stimulatedgene 管内注射生理盐水2mL。试验全程饲料中均不添加 15，ISGl5)等细胞因子在支原体感染及肺部炎症过 抗生素，感染2周后，使用绵羊支原体肺炎EusA 程中起重要的作用心。4J。本试验通过实时荧光定量 抗体检测，A和B组羊均为阳性，c组均为阴性。 PCR的方法检测人工感染支原体肺炎绵羊外周血单 1．3 PCR引物设计与合成 核淋巴细胞(PBMCs)中IFN—Y、IL一12和ISGl5 mRNA的表达水平，探讨其在支原体肺炎发病机制上列，利用Primer 的作用。 1材料与方法 1．1主要材料 绵羊肺炎支原体菌株由石河子大学动物科技学院 预防兽医实验室提供；农九师170团羊场提供的6只物：5’一CAAGTAAccCAGATGTAGc一3 7；下游引物： 盘羊杂交羊(盘羊6×巴什拜羊早，对绵羊肺炎支原 5 体易感)，塔城裕民县提供的12只巴什拜羊(对绵 7；下游引物： 羊肺炎支原体有抗性)，均为2～3月龄，体重为10 —15蚝，绵羊支原体肺炎ELISA抗体检测均为阴性； 淋巴细胞分离液购自灏洋生物制品公司；Trizol试剂