HPLC测定黄连上清片中有效成分的含量.docVIP

精品论文 参考文献 HPLC测定黄连上清片中有效成分的含量 1．唐山市工人医院集团第八医院 药剂科 河北唐山 063000 摘要：目的：建立多波长HPLC同时测定黄连上清片中三种成分含量的方法。方法：采用Eclipse XDB-C18色谱柱（5 mu;m，150 mmtimes;4.6 mm），以A（0.1%磷酸水溶液（0.1%三乙胺））-B（甲醇）为流动相进行梯度洗脱；检测波长分别为238 nm、230 nm、278 nm。结果：栀子苷、盐酸小檗碱、黄芩苷质量浓度分别在各自浓度与峰面积线性关系良好；结论：该方法准确可靠，可用于该制剂的质量控制。 关键词：多波长HPLC；栀子苷；盐酸小檗碱；黄芩苷；含量测定 材料与方法 1 仪器与试药 1.1 仪器 Agilent 1200系列高效液相色谱仪；真空抽滤泵（大连依利特公司）；涡旋混合器（XW-80A上海医科大学仪器厂）；Sartorius CP225D电子天平（德国Sartorius公司）；数控系列超声处理器FS-150N（上海生析超声仪器有限公司）。 1.2试药 栀子苷对照品（97.5%，批号：110749-201316）；盐酸小檗碱对照品（98.1%，批号：110713-200208）；黄芩苷对照品（批号：110715-200514），来源都是中国食品药品检定研究院；色谱纯甲醇（天津市协和昊鹏色谱科技有限公司）；磷酸（分析纯）；三乙胺（分析纯） 2 色谱条件 2.1色谱柱 Eclipse XDB-C18（5 mu;m，150 mmtimes;4.6 mm）；流动相为A（0.1%磷酸水溶液（0.1%三乙胺））-B（甲醇）；梯度洗脱（0 ～ 6 min，70% A；6 ～ 15 min，70% A ～60% A；15 ～ 25 min，60% A；25 ～ 30 min，60% A ～70% A）；流动相体积流量1.0 mL/min，柱温30 ℃，进样量5 mu;L；检测波长为230 nm（小檗碱）、238 nm（栀子苷）、278 nm（黄芩苷）。 2.2溶液的制备 2.2.1对照品混合溶液的制备 分别称取栀子苷、盐酸小檗碱、黄芩苷适量于50 mL容量瓶中，加甲醇溶解，定容至刻度，制成对照品贮备液。再分别精密量取上述贮备液各2 mL置于同一10 mL量瓶中，加甲醇定容至刻度，制成质量浓度为31.24 mu;g/mL的栀子苷、20.00 mu;g/mL的小檗碱、50.00 mu;g/mL的黄芩苷对照品混合溶液。色谱图见图1。 2.2.2供试品溶液的制备 取本品细粉，约0.3 g，精密称定后置于50 mL容量瓶中，加甲醇溶解，超声处理（80 W，20 kHz）30 min，每10 min停1 min，放置室温，加甲醇至刻度，摇匀，用0.45 mu;m微孔滤膜过滤，取续滤液即得样品溶液。色谱图见图2。 2.3方法学考察 2.3.1线性关系考察 分别精密吸取各对照品储备液0.125 mL、0.5 mL、1 mL、4 mL、8 mL，分别置于10mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，配制成7个浓度的对照品溶液。分别精密吸取5 mu;L注入液相色谱仪，记录色谱。将峰面积（Y）对标准品浓度（X）进行线性回归，得栀子苷回归方程为Y=7.667 3X+1.857 6（r =0.999 9，n=5），在1.95～124.96 mu;g/mL范围内呈良好的线性关系；盐酸小檗碱回归方程为Y=12.078X+0.292 6（r =0.999 9，n=5），在1.25～80.00 mu;g/mL范围内呈良好的线性关系；黄芩苷回归方程为Y=15.121X+1.259 1（r=0.999 9，n=5），在3.125～200.00 mu;g/mL范围内呈良好的线性关系。 2.3.2 精密度试验 精密吸取同一对照品溶液5 mu;L，重复进样5次，栀子苷、盐酸小檗碱、黄芩苷峰面积的RSD分别为0.74%、0.80%、0.73%。表明仪器精密度良好。 2.3.3 稳定性试验 精密吸取同一供试品溶液（河南百年康鑫药业有限公司，批5 mu;L，分别于第0 h、2h、4 h、8 h、12 h、24 h进样，测定峰面积。栀子苷、盐酸小檗碱、黄芩苷峰面积的RSD分别为0.76%、0.43%、0.30%。表明供试品溶液室温放置24h内稳定。 2.3.4重复性试验 取同一批样品（河南百年康鑫药业有限公司，批6份，按2.2.2项下方法处理，依法测定峰面积，每份测定3次，外标法计算含量栀子苷、盐酸小檗碱、黄芩苷平均含量分别为每克含3.666 mg（RSD=0.22%）、2.7