玉米超高蛋氨酸18kdδ-醇溶蛋白基因dzs18克隆及其原核-玉米科学.pdfVIP

玉 米 科 学2016，24(3)：42～50 JournalofMaizeSciences 文章编号：1005-0906(2016)03-0042-09 DOI:10.13597/ki.maize.science 玉米超高蛋氨酸18kDδ-醇溶蛋白基因 dzs18克隆及其原核表达 1 1 2 1 1 1 李 鹏 ，宫赫阳 ，王振萍 ，吴委林 ，康泽然 ，郑大浩 (1.延边大学农学院，吉林 延吉 133002；2.吉林省通化市农业科学院，吉林 海龙 135007) 摘 要：以玉米自交系吉818和富含蛋氨酸(Met)的BSSS53为材料，克隆编码超高蛋氨酸18kDδ-醇溶蛋白 (18kDδ-zein)的dzs18基因，并进行原核表达。结果表明，BSSS53中分离的目标DNA序列，其ORF内有8个碱基替换 突变，第208个碱基C发生缺失，导致移码突变、产生截短的多肽链。从吉818中分离的目标DNA长度为741bp，含 有由648bp构成的ORF，编码由215个氨基酸组成的超高蛋氨酸吉818-18kD-δ-zein。与参考序列相比，目标DNA 序列中存在29个碱基替换突变、15个碱基的片段插入和3个碱基的片段缺失。吉818-18kD-δ-zein中Met残基数 占27.9%，是10kDδ-zein的2倍，且比参考蛋白多20%，其中部蛋氨酸高密区(HMQR)内Met残基数占50.0%。玉米 dzs18在原核细胞中的表达受菌株的影响，在大肠杆菌BL21(DE3)中不表达，在Rossetta(DE3)中正常表达。ITPG浓度 在0.1～1.5mmol/L范围内对目标蛋白的表达量没有明显影响；在1～5h范围内，目标蛋白量随诱导时间的延长而增 加，超过6h，增加不明显。玉米dzs18基因在Rossetta(DE3)中表达的目标蛋白以包涵体即不溶性蛋白质颗粒形式 存在。 关键词：玉米；dzs18基因；18kDδ-zein；原核表达；菌株；包涵体 中图分类号：S513.035.3 文献标识码：A CloningandProkaryoticExpressionofdzs18GeneEncoding MethionineSuper-rich18kDδ-zeinofMaize 1 1 2 1 1 1 LIPeng,GONGHe-yang,WANGZhen-ping,WUWei-lin,KANGZe-ran,ZHENGDa-hao (1.AgriculturalCollege,YanbianUniversity,Yanji 133002; 2.TonghuaAcademyofAgriculturalSciences,Hailong135007,China) Abstract:MaizeinbredlinesJi818andmethionine(Met)-richBSSS53asthematerials,cloningandprokary⁃ oticexpressionofdzs18geneencodingMet-super-rich 18kD δ-zeinwereconducted.Theresultsshowedthatthe targetDNAsequencefromBSSS53had8basesubstitutionmutationsandasinglebasedeletionofthe208thbaseC withinitsORF,resultinginframeshiftmutationandproducing