精品第六章 高通量筛选技术.pptVIP

三、高通量筛选的技术过程 1、样品库 2、初筛和复筛 3、活性化合物 4、深入筛选 5、获得少量先导化合物 6、确证筛选药物药理学研究 7、侯选药物 8、临床前研究 HTS筛选的基本步骤 第一步是选择分子靶。选择的依据是来源于国际医学生物学的新成果。目前国际常用的分子靶有以下几类：A、细胞膜受体；B、离子通道蛋白；C、酶蛋白；D、细胞核受体；E、转运蛋白。 第二步是建立稳定表达分子靶的生物体系。 靶是蛋白---克隆相对应的蛋白，在大肠杆菌中表达和提纯； 靶是细胞受体---克隆出的基因转化到载体细胞中，建立稳定的细 胞株。 第三步建立简便快速的大规模的生物检测方法。 根据靶的不同分为两类： 1、以蛋白等分子为基础； 2、以 细胞为基础 酶蛋白---测定酶活性的变化； 细胞膜受体---测定配体-受体的结合； 细胞核受体---测定蛋白的表达。 在建立大规模生物检测方法的同时，要用组合化合物的方法合成大量不同结构的化合物库相配套。 HTS药物筛选靶点与检测方法 （1）、分子靶点筛选模型---细胞信号通路筛选系统 外界信号从细胞表面传递到细胞内，或者直接穿过细胞膜进入到细胞质和细胞核，最终影响某些基因的转录。在这个传递过程中，某些特殊的细胞或一些病理状况下，可能是其中的一条或几条通路起作用，药物可以根据需要对这些通路进行阻断。 使用信号通路筛选系统，可直接对药物作用的分子机制有所了解。 （2）、细胞膜表面受体筛选模型 a.G蛋白耦联受体：受体与GTP结合的调节蛋白的耦联，在细胞内产生cAMP，从而将外界信号跨膜传递到细胞内。如趋化因子受体、β-受体阻断剂等。 b.催化受体：为单跨膜受体，分为胞外区，跨膜区和胞内区。当细胞因子与胞外区结合后，引起多个受体单体的聚合，每个聚合体的受体单体可以是同一类型，也可以不同。如EPO、G-CSF、GH受体2个同样的单体；IL-1，GM-CSF，IL-6受体是2个不同的单体；TNF-α是3个同样的单体；IL-2是3个不同的受体。 c.离子通道耦联受体 ：细胞表面一些神经递质的受体，自身是一些离子通道，或者与离子通道相耦联。当与配体结合时，受体构象改变，通道开放，离子进出细胞，引起电兴奋。 作业 第四章 微生物杂交育种 1、放线菌杂交方法有哪些？简述每种方法的具体过程？ 第五章 基因工程育种 1、简述基因体外定位诱变的方法。 第六章 高通量筛选技术 1、简述表面展示技术的方法。 2、什么是报告基因？作为报告基因，在遗传选择和筛选检测方面应具备哪些条件？常见报告基因有哪些？ 本课程考核方式 写一篇与微生物遗传育种相关的综述。字数不低于4000字。 期末成绩=平时20%+实验20%+论文60% 评分办法 课程论文占60%，其评分标准如下： 1）选题新颖（热点问题的研究、空白问题的探索、老问题的新视野）（10分） 2）结构合理、行文流畅、逻辑严谨、学术语言规范（20分） 3）观点鲜明、资料翔实、立论深刻、有所创新（30分） 4）注释与参考文献（文献数量、种类、外文文献）（10分） 5）规范程度：题目、内容提要、关键词、正文、注释、参考文献（20分） 6）总结全文的主要论点和发展方向，指出目前研究中尚需解决的问题及研究成果的意义和价值。（10分） 7）字数不少于4000字，每少100字扣1分。 论文格式要求 1、题名（黑体，小三，居中） 2、姓名、班级、学号（仿宋、小四、居中） 3、摘要：对全文进行概括，提出研究目的与意义，论文主要内容，150字左右（五号，楷体，首行缩进2字符，行距固定值20磅。“摘要”二字加粗） 4、关键词：3~8个（五号，楷体，首行缩进2字符，各关键词之间加分号；最后一词之后不加标点符号。 “关键词”三字加粗） 5、正文五号宋体（全文所有西文字体均采用Times New Roman），首行缩进2字符，行距固定值20磅。 6、前言：简要介绍研究背景，研究现状（不要与摘要重复） 7、正文标题采用编码格式，一级标题加粗，示例如下： 1 空间诱发微生物突变的作用机制研究 2 微生物空间诱变的研究与进展 2.1空间诱变对微生物产酶活性的影响 2.2空间诱变对微生物产次级代谢产物活性的影响 2.3 …… 3 问题和展望 3.1 …… 9、正文最后要有结语（或展望）。对全文作总结，