女贞子对糖尿病大鼠外周血和肾组织核因子-κB的影响.docVIP

精品论文 参考文献 女贞子对糖尿病大鼠外周血和肾组织核因子-κB的影响 复旦大学附属中山医院青浦分院肾内科 上海青浦 201700 【摘要】目的 探讨女贞子对糖尿病大鼠肾组织与外周血单个核细胞（PBMC）中核因子-кB（NF-кB）活性的影响。方法 30只雄性SD大鼠分成对照组、糖尿病组和女贞子治疗组；酶联免疫吸附法（ELISA）测定各组大鼠PBMC中NF-кB活性；免疫组化检测各组大鼠肾组织NF-кB和单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）表达。结果 糖尿病大鼠PBMC和肾小球中NF-кB活性显著高于对照组（Plt;0.01）。与糖尿病大鼠相比，女贞子明显抑制NF-кB活化及MCP-1和纤粘连蛋白（FN）表达（Plt;0.05），减少24小时尿蛋白排泄，降低血糖、血脂，减轻肾小球肥大、系膜细胞增生和细胞外基质堆积。结论 女贞子对实验性糖尿病大鼠肾组织损害具有明显的保护作用，抑制NF-кB的活化可能是女贞子发挥肾脏保护作用的机制。 【关键词】糖尿病肾病；大鼠；NF-кB；女贞子 [中图分类号] R587.2 [文献标识码] A [文章编号]1672-5018（2016）04-187-02 糖尿病肾病（Diabetic Nephropathy，DN）是糖尿病严重微血管并发症之一。近年来，DN已被看成是一种由代谢紊乱诱发的炎性疾病[1]。核因子-кB（NF-кB）信号转导通路是公认的体内介导炎症反应的主要通路，并在糖尿病DN的发生发展中起重要作用。目前女贞子干预糖尿病肾病进展的文献报道极少。本研究旨在观察NF-кB、单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）在糖尿病大鼠外周血和肾组织中表达及女贞子对其表达的影响，探讨女贞子对糖尿病大鼠肾脏保护作用及其可能机制。 一、材料与方法 1．动物及分组：雄性SD大鼠30只，体重210-240g，血糖正常。大鼠随机分成3组，分别为C组（正常对照组）；DM组（糖尿病组）；DL组（糖尿病+女贞子治疗组）。 2.糖尿病大鼠模型建立：DM组及DL组采用链脲佐菌素（STZ，Sigma公司）60mg/Kg一次性腹腔注射。72小时后，随机血糖值ge;16.5mmol/L确定为模型制备成功。模型建立后，DL组予女贞子（酒制、打粉后水煎30分钟）8g.Kg-1.d-1灌胃，DM组及C组喂予等量饮用水。 3.生化指标测定，雅培2000型自动生化分析仪测定空腹血浆肌酐（Cr）、血糖（FBG）、总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG），考马斯亮蓝测定24小时尿蛋白。 4.免疫组化和组织病理学观察：大鼠右肾石蜡切片SABC法测定肾小球NF-кB、MCP-1、纤粘连蛋白（FN）表达（武汉博士德公司），分别观察肾小球中NF-кB、MCP-1表达，BioMaix彩色图像分析系统分析肾小球中FN染色阳性的平均光密度；常规HE、PAS染色，光镜观察肾组织形态变化。 5.外周血单个核细胞（PBMC）NF-кB活性测定：Ficoll密度梯度离心法，分离各组大鼠PBMC；按TransAM核蛋白提取试剂盒（美国Activemotif公司）说明操作，提取核蛋白；按TransAM NF-кBp65试剂盒（美国Activemotif公司）方法测定PBMC中NF-кB活性。 6.统计学分析 实验结果以plusmn;s表示，组间比较采用t检验。 二 结果 1.各组生化指标及24小时尿蛋白变化 DM组TC、TG、Cr均高于C组（Plt;0.01），DL组上述指标和DM组相比较有显著性差异（Plt;0.05）；DM组、DL组血糖值和C组有明显差异（Plt;0.01），DM组血糖值和DL组有差异（Plt;0.05）；C组24小时尿蛋白和DM组之间有明显差异（Plt;0.01），DL组24小时尿蛋白比DM组明显降低（Plt;0.05）。见表1。 3.肾组织病理学改变 HE染色DM组大鼠肾小球系膜区基质中度增多，系膜细胞轻度增生，小管间质散在单个核细胞浸润，DL组上述病理改变均有不同程度减轻；PAS染色C组未见明显病理改变，DM组细胞外基质明显增多，系膜区扩大，DL组可见细胞外基质增加，但较DM组减少，系膜区扩张较DM组明显减轻。 三、讨论 DN早期基本病理改变包括系膜细胞肥大、细胞外基质堆积及肾小球基底膜增厚，是引起早期DN尿蛋白排泄增加的主要原因。本实验结果显示，糖尿病（DM）大鼠成模后8周，大鼠尿蛋白排泄明显增加，血糖、血胆固醇、甘油三酯及血肌酐水平升高，肾小球肥大，细胞外基质增多，表明已具有早期的DN特征。 核因子-к