类弹性蛋白和内含肽融合表达纯化重组人防御素3.pdfVIP

第 35卷第 4期 扬州大学学报 (农业与生命科学版) Vo1．35No．4 2O14年 12月 JournalofYangzhouUniversity (AgriculturalandLifeScienceEdition) Dec．2O14 类弹性蛋 白和 内含肽融合表达 纯化重组人防御素 3 刘文俊 ，吴 倩 ，高 慧 ，徐 碧 ，张鑫宇 ，夏晓莉 ，孙怀 昌 (1．扬州 大学 兽医学 院／江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心 ，江苏 扬州 225009； 2．扬 州大学 医学院 ，江苏 扬州 225001) 摘 要：为建立简单、经济的重组人 口防御素 3(HBD3)制备方法，将 HBD3序列插入类弹性蛋 白(ELP)与 AI—CM 内含 肽融合表达载体 ，将重组载体转化大肠杆菌，2O℃下用 IPTG诱导融合蛋 白表达 ，在优化条件下进行相变循环 ，用 内含 肽 自裂解活性释放 目的蛋 白，用琼脂扩散和最小抑菌浓度法测定重组 HBD3抗菌活性 。结果表 明：融合蛋 白在重组菌 中获得可溶性表达 ，第 1轮相变循环 的纯度为 85．7 ，再次相变循化 的纯度达 93．1 ；内含肽裂解温度为 28℃，孵育 12h裂解效率 达 9O．3 ；重组 HBD3回收率 达 74．8 ，产量为 0．98mg ·L一，纯 度为 92．6 ，内毒素含量低于 0．03U ·mg (蛋 白)，对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌具有显著的抑菌活性。说 明基于 ELP相变循化和内含肽 自裂解 的重组蛋 白表达与纯化系统可用于重组 HBD3的规模化制备。 关键词 ：类弹性蛋 白；内含肽 ；人 口防御素 3；表达 ；纯化 中图分类号 ：Q516 文献标志码 ：A 文章编号 ：1671—4652(2014)04—0001—05 Elastin-·likepolypeptideandintein-·mediatedexpression and purificationofrecombinanthuman defensin3 LIUWenjan ，WUQian ，GAOHui，XUBi，ZHANGXinyu ，XIAXiaoli，SUNHuaichang (1．JiangsuCo—InnovCentforPreyandContofImpAnim InfectDisandZoonoses／ CollofVetMed，YangzhouUniv，Yangzhou225009，China； 2．CollofMed，YangzhouUniv，Yangzhou225001，China) ABSTRACT：Toestablishasimpleandeconomica1methodforpreparationofrecombinanthuman口defensin(HBD3)，the codingsequenceforHBD3wasclonedintoelastin-likepeptide(ELP)and△I-CM inteinfusionexpressionvector．Thecon— structwastransformedintoE．coliandthefusionproteinexpressionwasinducedat20℃ withIPTG．Inversetransition cycling (ITC)wasperformedunderoptimizedconditions．TherecombinantHBD3wasreleasedbyintein-mediatedself- cleavageanditsanti—bacteria1activitywasmeasuredbyagardiffusionandminimum inhibitoryconcentration．Theresults showedthatEI—HBD3fusionproteinwasexpressedinasolubleform．AfterfirstroundofITC．thefusionproteinpurity was85．7 andincreasedto93．1 aftersecondroundofITC．Afterselfcleavageat28 ℃ for12h，thecleavagerateof fusionproteinwas90．30,4．AfteranadditionalroundofITC，therecovery