c-Myc标签Co-IP试剂盒中文说明.docVIP

23620 描述 ProFound? c-Myc Tag IP/Co-IP Kit 包含了足够25个与c-Myc –标签蛋白IP或Co-IP的成分，包括10个c-Myc –标签阳性对照的实验 试剂盒成分： Immobilized Anti-c-Myc, 62.5 g固定的珠状琼脂加上125g 抗体，以含25%的溶液和0.1%叠氮钠的PBS的形式提供(总体积为250ul)。 BupH? Tris Buffered Saline Pack, 一个包装，用500 ml超纯水稀释后，溶液成分为25 mM Tris, 0.15 M NaCl, pH 7.2 Elution Buffer, 50 ml, pH 2.8 Lane Marker Non-Reducing Sample Buffer (5X), 5 ml, 包含0.3 M Tris?HCl, pH 6.8, 5% SDS, 50% 甘油, 电泳指示剂。 Handee? Spin Columns Accessory Pack, 含提前放置好的玻璃原料，顶盖和底盖的27 Collection Tubes and Caps Accessory Pack, 100 有刻度的2 ml 管子和塞盖 c-Myc-tagged Positive Control, 500ul，1 mg/ml E. coli 提取的包含c-Myc-标签GST（古胱氨酸S-转移酶） 储藏: 收到后，将c-Myc-标签阳性对照放在-80度冰箱，（在-20度可放6个月），将其他所用到的成分放在4度，c-Myc-标签阳性对照用干冰运输。 注意： ProFound? c-Myc Tag IP/Co-IP Kit是ProFound? c-Myc Tag IP/Co-IP Application Set (23622) 和 c-Myc-tagged Positive Control (23633)的联合体。 介绍 ProFound? c-Myc Tag IP/Co-IP Kit与用蛋白A/G琼脂糖的IP方法相比，传统的提供了一个简单快速的方法来研究c-Myc-标签蛋白。高亲和性的抗c-Myc抗体相连的琼脂糖使得c-Myc标签蛋白和其相互作用的不含抗体的成分的IP和Co-IP。Handee?离心管能使其产物带有小体积的固定抗c-Myc(抗c-Myc琼脂糖)，并能够在整个过程中作为一个单独的离心管，防止在洗脱的时候抗c-Myc琼脂糖的损失。Handee?离心管通过有效的分离Buffer，进一步加强了从抗c-Myc琼脂糖的回收率。 (EQKLISEEDL)组成c-Myc标签蛋白的IP是c-Myc标签抗体来识别来自于天然蛋白的表达蛋白。ProFound? c-Myc-Tag IP/Co-IP Kit用了高亲和力的c-Myc标签抗体使得标签蛋白的分离和鉴定不受其表达水平的限制。抗体和琼脂糖之间的共价连接导致了IP产物免受抗体的污染。c-Myc标签阳性对照用来验证IP和抗c-Myc标签琼脂糖。Handee?离心管有利于在IP/Co-IP过程中c-Myc标签琼脂糖的完全保留，并使因为c-Myc标签琼脂糖损失造成的实验误差达到最小（请看附录中与试剂盒相关的离心管图标和数据）。步骤简介 重要的产品信息 为了得到最好的结果，在尝试IP之前，需要确定含c-Myc标签融合蛋白表达的合适实验条件。 试剂盒提供的buffer使得有足够的灵活度来确定分离相互作用蛋白的最适条件。相互作用蛋白的特点可能需要改变结合和洗脱buffer。蛋白共因子，二价阳离子，洗涤剂或附加的盐离子可能会用到。 用一个非转染的细胞裂解液作为阴性对照来确定c-Myc标签琼脂糖的非特异性连接蛋白。c-Myc标签阳性对照（c-Myc-tag IP/Co-IP 试剂盒提供的）用来验证抗c-Myc标签琼脂糖是否能够成功的结合c-Myc标签蛋白。 为了获得c-Myc标签蛋白的最好结果，在准备所有裂解液时候，添加蛋白酶抑制剂(Halt? Protease Inhibitor Cocktail, EDTA-Free, Product No. 78415)。所需要的另外的材料 Microcentrifuge capable of 16,000 × g Protease inhibitors (Halt? Protease Inhibitor Cocktail, EDTA-Free, Product No. 78415) Tween?-20 (Surfact-Amps? 20, Product No. 28320) End-over-end rocker or rotator Heat block 0.2 ?m, 500 ml filter apparatus 1 M Tris