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胶束在线扫集毛细管电泳法测定三聚氰胺李利军Ξ,郝学超,程昊,吴启涛(广西工学院生物与化学工程系,柳州545006)摘要:研究胶束在线扫集毛细管电泳法测定三聚氰胺的可行性,结果表明,与区带毛细管电泳相比,胶束在线扫集毛细管电泳法富集倍数提高约60倍。缓冲体系为140mmolΠLSDS+20mmolΠLNaH2PO4(pH2.20)+10%(体积分数)甲醇,分离电压-18kV,进样时间30s,测量波长214nm。考察了SDS浓度、pH、进样时间、运行电压等因素对分离测定的影响情况。在优化条件下,三聚氰胺在9min时出峰,峰面积RSD≤3.7%。方法检出限、线性范围、相关系数分别为:0.13μgΠmL、0.50～32.0μgΠmL、0.9997。方法可用于奶粉中三聚氰胺的分离测定。关键词:毛细管电泳;胶束扫集;三聚氰胺中图分类号:O657.8文献标识码:A文章编号:100020720(2010)012076204由于奶粉成分复杂,如何快速准确的测定奶粉中的三聚氰胺受到关注1～4。目前较权威的检测方法主要为高效液相色谱法、液相色谱2质谱法、气相色谱2质谱联用法5～7。毛细管电泳法(CE)作为一种新兴的分离分析技术,具有分离效率高,消耗样品少,无需昂贵的色谱柱与复杂的前处理等诸多优点8,但是毛细管电泳法因检出限、重现性、以及蛋白质容易在毛细管内壁吸附等因素,用于奶粉中三聚氰胺的分离测定的研究尚不多见。本实验利用胶束在线扫集9,10的优势,利用毛细管电泳分离测定奶粉中的三聚氰胺,建立了胶束在线扫集毛细管电泳法测定三聚氰胺的新方法。与高效液相色谱法相比,减少了样品预处理的程序,缩短了检测时间,减少了试验费用;与区带毛细管电泳相比,胶束在线扫集毛细管电泳法灵敏度提高约60倍。1实验部分1.1仪器与试剂ACS2000高效毛细管电泳(北京彩陆公司),未涂层毛细管(50μm×6910cm,有效长度3510cm)。检测波长214nm。DL260D超声波清洗器(上海之信公司);超声2微波协同萃取仪(上海新拓微波溶样测试技术公司);MettlertoldedoDelta320酸度计(瑞士梅特勒托利多公司)。三聚氰胺对照品;三鹿牌青壮年奶粉(石家庄三鹿集团);三氯乙酸、乙腈、H3BO3、NaOH、NaH2PO4、H3PO4、CH3OH(汕头西陇化工厂);十二烷基磺酸钠(SDS,汕头光华化工厂)。以上试剂均为分析纯。水为双蒸水。1.2实验方法毛细管的处理:每天实验前依次用1molΠLNaOH溶液、二次重蒸馏水分别冲洗15min,进样前用缓冲液冲洗30min,实验3h后更换缓冲液。实验结束后用二次蒸馏水冲洗,并用二次蒸馏水浸泡过夜。实验所用的溶液进样前均用0.45μm的滤膜过滤,并经超声波脱气30min。对照品的预处理:准确称取三聚氰胺对照品4.0mg,用CH3OH配成浓度为0.16mgΠmL的对照品贮备液。样品预处理:准确称取51000g奶粉样品,加入15mL质量分数为1%三氯乙酸和5mL乙腈,搅拌后于超声2微波协同萃取仪中超声萃取15min,离心震荡10min,取上清液用0.45μm滤纸过滤,Ξ收稿日期:2009203212;修订日期:2009205220作者简介:李利军(1966-),男,教授;E2mail:lilijun0562@—76—第29卷第1期2010年1月分析试验室ChineseJournalofAnalysisLaboratoryVol.29.No.12010-1超声脱气,定容至25mL。胶束扫集毛细管电泳缓冲液的配制:电泳缓冲液用100mmolΠLNaH2PO4、200mmolΠLSDS储备液配制,pH用体积分数85%H3PO4调节。所有溶液进入毛细管前均用0.45μm滤纸过滤,超声脱气。2结果与讨论2.1电泳运行条件选择2.1.1缓冲体系本实验采用低pH法抑制电渗流,选用磷酸盐缓冲体系,并分别在pH为2100、2120、2140、2160和2180时考察了三聚氰胺的测定情况。不同的pH对三聚氰胺的测定影响不大,但pH越小,电流越大,3种样品的出峰时间也稍微提前。综合考虑,选择pH2120,此时接近H3PO4pKa1,缓冲溶液具有较高的缓冲能力,电泳电流适当。2.1.2有机改性剂的选择及浓度优化实验了甲醇、乙腈、异丙醇和乙醇等4种不同的有机改性剂对出峰的影响。结果表明,甲醇和乙腈能使三聚氰胺样品的峰型得到改善,但出峰时间比不加入有机改性剂时有所延长,其中甲醇出峰时间较短,三聚氰胺的峰形良好,因而本实验选择甲醇为改性剂。实验了甲醇体积分数为5%、8%、10%和15%时的出峰情况,结果表明,甲醇体积越大,出峰越慢,峰宽越大,当甲醇体积分数为10%时,峰型和出峰时间均较理想,因而实验选定甲醇体积分数为10%,此时出峰时间≤9min。当SDS浓度