毛细管电泳激光诱导荧光法优化量子点鄄转铁蛋白偶联体系-分析化学.PDFVIP

第4 1 卷 分析化学 (FENXI HUAXUE )摇 研究报告 第5 期 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 2013 年5 月 Chinese Journal of Analytical Chemistry 725 ~731 DOI:10.3724/ SP.J.1096.2013.20888 毛细管电泳激光诱导荧光法优化 量子点鄄转铁蛋白偶联体系及用于细胞标记 1 1,2 1 * 1 梅 芳摇 赵新颖 摇 张璐 摇 屈 锋 1 2 (北京理工大学生命学院,北京 100081)摇 摇 (北京市理化分析测试中心,北京 100089 ) 摘摇 要摇 利用毛细管电泳激光诱导荧光(CE鄄LIF )表征了偶联剂N鄄羟基硫代琥珀酰亚胺 (NHS ) 及NHS 和 1鄄(3鄄二甲氨基丙基)鄄3鄄乙基碳二亚胺盐酸盐 (EDC ) 混合偶联剂对 CdTe 量子点活化效果的差异,优化了 CdTe 与转铁蛋白(Trf )的偶联条件,比较了CdTe鄄Trf ,CdTe鄄BSA 偶联物及CdTe 量子点对Hela 细胞的标记效 果。 结果表明: NHS 活化后的量子点性能优于混合偶联剂EDC鄄NHS。 31.2 滋mol/L Trf 与CdTe 形成的偶联物 CdTe鄄Trf 对Hela 细胞的标记效果最佳。 CdTe鄄Trf 在4 益孵育20 min 可快速标记在 Hela 细胞的表面;在 37 益孵育7 h 后,可进入Hela 细胞内。 说明所制得的CdTe鄄Trf 偶联物具有Trf 的生物功能,它可通过特异性 识别并结合细胞膜表面的Trf 受体而转入Hela 细胞。 而CdTe鄄BSA 偶联物的标记不具特异性,CdTe 则不能 用于Hela 细胞的标记。 关键词摇 毛细管电泳鄄激光诱导荧光 (CE鄄LIF ); 量子点; 转铁蛋白; 偶联; 细胞标记 1摇 引摇 言 转铁蛋白(Trf)是脊椎动物体中一种非血红素结合铁的茁鄄球蛋白,可与细胞膜上的Trf受体结合,内 吞化形成内吞小体。 在特定信号介导下,Trf可以通过释放铁离子,转移出细胞膜外。 由于恶性肿瘤细 [1,2] 胞过度表达Trf受体,因此,通过标记Trf可进行肿瘤细胞的识别、诊断和治疗研究 。 量子点作为一 种新型荧光材料,近年来在生物成像研究中快速发展,特别是在细胞可视化研究方面[3~11]。 量子点用 于细胞标记一般需将量子点与靶蛋白偶联,再通过靶蛋白结合在细胞膜或进入胞内显示量子点的荧光, 由此进行靶蛋白在细胞膜及胞内的定位及成像分析。 因此靶蛋白与量子点的偶联体系的构建是量子点 生物成像应用的基础。 本研究选取Trf为靶蛋白,通过其与细胞膜上的Trf 受体结合,进而转运靶蛋白鄄量子点的偶联物。 目前,量子点与蛋白质的偶联多采用生物素亲和素法、共价法及静电吸附法等。 蛋白质与量子点偶联 时,二者的混合比例决定偶联产物的质量以及生物功能化的效果。 在量子点与蛋白质的偶联反应中建 立高效、快速、低成本方法进行表征,对于偶联体系的优化,提高偶联效率非常必要。 本研究利用毛细管 电泳激光诱导荧光法(CE鄄LIF)的高效、快速、高灵敏和样品用量少等优势,对Trf与量子点CdTe偶联的 方法和条件进行快速优化,并将得到的CdTe鄄Trf偶联物不经分离而直接用于Hela细胞标记。 通过激光 共聚焦显微镜进行标记效果的成像观察。 实验结果表明,CdTe鄄Trf偶联物具有Trf 的生物功能,并能特 异性识别细胞膜表面的Trf受体,在其介导下可转运到Hela细胞内,分布在胞质中。