栀子苷致大鼠肝毒性时量关系及其机理研究.docxVIP

药用植物化学与中药资源可持续发展学术研讨会栀子苷致大鼠肝毒性时一量关系及其机理研究丁越，张彤。，项乐源，浦益琼，陶建生(上海中医药大学，上海，201203)I摘要1目的：研究栀子苷致大鼠肝毒性的量效、时效关系及自由基损伤机制。方法：大鼠口服 不同剂量栀子苷，测定其LD50。另取人鼠按不同剂量或不同时间点分组，检查血清ALT等肝功能指标和肝组织形态变化，测定肝组织SOD，MDA。结果：人鼠口服栀子苷的LD50为1431．2mg·kg-‘，显示大鼠灌胃存在低毒作用。对栀子苷致大鼠肝毒性时．效关系的研究显示：大鼠El服861．2mg·kgq的 栀子苷后，血清TB，ALP，ALT，AST等肝功能指标随时问推移逐渐增高，在24．48h达到高峰，然后逐渐下降；肝脏指数也旱现同样的变化趋势。对栀子苷致人鼠肝毒性量．效关系的研究显示：与正常组比较，栀子苷给药剂量升高到574mg·kg～，TB、ALP、ALT、AST均有所升高，ALT有显著性差异(Po．01)；随着栀子营剂革增加，TB、ALP、ALT、AST升高幅度也增大，提示有一定的量效关系。肝脏指数(g·1009叫)实验结果显示栀子苷给药剂量升高至U861．2mg·kg。1后，肝脏指数有明显升高 (P0．05)，同CCl4给药组结果相似。再结合栀子苷光镜下栀子苷的组织形态学变化，可初步认为栀子苷大鼠t：i服至肝毒剂量为574mg·kg～。对栀子苷肝毒性机制在自由基损伤方面作了初步研究：大鼠1次口服819．2mg·kg-1栀子苷48后，肝组织SOD显著降低而MDA有所升高，与正常组相比，SOD／MDA有显著性著异(Po．05)，其变化与四氯化碳组相似。结论：大鼠一次性口服大剂量栀子苷可造成急性肝损伤甚至死亡，并显示有毒性时．效、量．效关系；自由基损伤可能是其肝毒性机制之一。栀子为茜草科植物栀子GardeniaiasminoidesEllis．的干燥成熟果实。性味苦寒，入心、肝、肺、胃、三焦，具有泻火除烦，清热利湿，凉血解毒，消肿止痛之功效【lj，作为利胆保肝，消肿止痛的常用中药，广泛用于临床治疗中。栀子苷被认为是栀子的主要成分，具有保肝解毒、抗氧化等活性，对四氯化碳【引、异硫氰酸．1．萘酯【引、黄曲霉素B1【4J等导致的肝损伤具有良好的保护作用。但是，近年来也出现了一些关于栀子毒性的报道，杨洪军15J的研究证实3．089·kg_的水提物、1．629·kg一的醇提物、O．289·kg-I栀子苷组均具有明显的肝脏毒性，并据此推测，栀子苷是栀子肝毒性的主要物质基础。王波16J等人将栀子水提物、醇提物、栀子苷给大鼠灌胃3d后，第4d解剖，在高剂量组病理检查肝脏、肾脏 都出现不同程度的毒性病变，并推测京尼平苷是栀子肝、肾毒性的主要物质基础。因此本文对栀子和栀子苷的肝肾毒性做进一步研究，通过研究栀子和栀子苷对大鼠的肝肾毒 性的量效关系、时效关系，推断栀子及其栀子苷可能对人体的有害作用及其机制，并以 高剂量反推至低剂量，以期得到(预测)药物的安全剂量。1仪器和材料1．1仪器梅特勒XSl05DU电子分析天平，梅特勒．托利多集团；SB3200超声波清洗器，上海波龙电子设 备有限公司；日立7080全自动生化分析仪，日本日立贸易有限公司；HP8453可见一紫外全波长扫描仪，美国安捷伦科技有限公司；摄片显微镜OlympusBX51，摄像头：moticam1300，摄像软件：MIAS医学图像分析管理系统，日本奥林巴斯光学株式会社生产；病理切片机LeicaRM2126，德国徕卡；THP．1病理摊片烘干机，上海科达医学模型有限公司。’基金项目：十一五支撑计划(2009ZX09103．449)通讯作者：张彤。男。教授。Tel：86-21E-mail：zhangtdmj@sohu．com药用植物化学与中药资源可持续发展学术研讨会1．2试剂和试药栀子苷成品，自制，批号：080407，HPLC步b标法含茸纯度为95．7％。四氯化碳，分析纯，北京 化工厂生产，批号：200810925。苏术素、无水乙醇、钾明矾、高锰酸钾、一氧化汞、盐酸、伊红。总胆红素(TB)试剂1，批号：AP966；TB试剂2，批号：AP967，均由和光纯药1：业株式会社(WAKO)生产；碱性磷酸酶(ALP)试剂1，批号D807；ALP试剂2，批号：D807，日本SHINO．TEST公司，SHINO—TESTCoRPo＆盯IoN；丙氨酸氨基转移酶(ALT)试齐IJl，批号：F813；ALT试剂2，批号：F808，日本SHINO．TEST公司．SHINO．TESTCORPo凡盯IoN；天冬氨酸氨基转移酶(AST)试剂1，批号：F812；AST试剂2，批号：F806，日本SHINO．TEST公司，SHINO．TESTCORPORATION；SOD检