乙肝表面抗原确证实验作业指导书.docVIP

分析原理 标本先用证实试剂和对照试剂预处理，随后再用HBsAg试验检测。HBsAg阳性质控品2同时平行测定以核对操作。 标本的预处理： · ElecsysHBsAg试验重复呈现有反应性的标本，用证实试剂和对照试剂平行处理，混匀，温育。证实试剂中过量的抗HBsAg抗体中和标本中的HBsAg。在随后进行的ElecsysHBsAg试验中，标本的Cutoff-指数（COI）将比原值降低。 HBsAg试验： · 第1步：二种经预处理的标本、生物素化的抗HBsAg单克隆抗体和钌（Ru）标记的抗HBsAg单克隆抗体混匀，形成夹心复合物。 · 第2步：加入链霉亲和素包被的微粒，让上述形成的复合物通过生物素与链霉亲和素间的反应结合到微粒上。 · 第3步：反应混和液吸到测量池中，微粒通过磁铁吸附到电极上，未结合的物质被清洗液洗去。电极加电压后产生化学发光，通过光电倍增管进行测定。 Elecsys自动将标本产生的光电信号与从抗HBsAg定标液得出的Cutoff值相比较。随后进行人工核查试验的有效性和结果的解释。 标本要求 Elecsys HBsAg试验重复呈现有反应性的人血清或血浆标本。标本采集和准备与Elecsys HBsAg试验相同。 试剂、校准品、质控品和其他所需材料 采用罗氏原装配套试剂。 试剂： 瓶1：证实试剂（黑盖），2瓶，1.3ml。抗HBsAg200IU/l，人血清。含 防腐剂。 瓶2：对照试剂（白盖），2瓶，1.3ml。人血清,抗HBsAg3IU/l。含防 腐剂。 校准品： 质控品： Elecsys HBsAg质控品1和2 （PreciControl）货其他所需材料： ·100人份的Elecsys HBsAg试剂盒 · Elecsys通用稀释液 货· Elecsys1010或2010分析仪 · Elecsys 系统缓冲液（ProCell）货· Elecsys 测量池清洗液（CleanCell）货· Elecsys 清洗添加剂（SysWash）货· Elecsys 系统清洗剂（SysClean）货仪器和校准 使用仪器：瑞士罗氏诊断公司生产Elecsys 2010/E 170/E 411全自动电化学发光免疫自动分析仪 仪器校准：定标次数和校正方法与Elecsys HBsAg试剂相同 操作方法 标本的预处理： 标本加样体积的选择取决于相应标本在ElecsysHBsAg试验中所得的COI值的高低。以下是各种不同体积的标本分别加入Elecsys 标本杯中： · 对于COI7.0的有反应性标本 180μL标本+20μl证实试剂 180μL标本+20μl对照试剂 或 · 对于7.0≤COI≤30的有反应性标本 100μl标本+100μl证实试剂 100μl标本+100μl对照试剂 或· 对于COI30的有反应性标本，标本先用Elecsys通用稀释液作1：20稀释。 100μl稀释的标本+100μl证实试剂 100μl稀释的标本+100μl对照试剂 平行测定PreciControl HBs Ag 2,以便对操作进行核对： 180μl PreciControl HBs Ag 2+20μl证实试剂 180μl PreciControl HBs Ag2+20μl对照试剂 充分混匀，将以上几种反应物15－25度温育30-60分钟或 2－8度温育过夜。 ElecsysHBsAg测定：将预处理标本置于仪器的标本区，记录标识数据。按ElecsysHBsAg试剂操作说明书进行检测。 定标：定标次数和校正方法与Elecsys HBsAg试剂相同。 质量控制 必须与标本同时平行测定Elecsys PreciControl HBs Ag 2。根据用户需要进行校正。对于Elecsys HBs Ag试验，质控按相应的说明书进行。 计算方法 对每一个标本，仪器会自动根据HBsAg定标液cal1和cal2的测定结果计算出cutoff值。报告结果，分有反应性或无反应性以及cutoff指数（COI）=标本信号值/cutoff等几种形式。证实试验中所加的标本体积需参考COI。 参考范围 分析性能 干扰因素 由于钩状效应，HBsAg浓度高于1mg/ml或550000IU/ml时，Elecsys HBsAg试验的cutoff 指数将30。这是因为在给定的加样体积下，证实试剂未能充分中和掉标本中的抗原，因而造成假阴性。由于稀释的缘故，这些标本 与对照试剂反应的COI值高于原来ElecsysHBsAg试验测出的COI值。从这一点可以鉴别有钩状效应的标本。这些标本必须在更高的稀释度（1：100）下重新检测。干扰因素与Elecsys HBsAg试验说明书