华南地区小种群禽类中h9n2亚型流感病毒特性研究small populations in south china h9n2 subtype of the influenza virus in poultry in characteristic research.pdfVIP

背景和目的： 近年来，在素有“世界流感流行中心”之称的华南地区禽流感频繁暴发，这 给人们带来了严重的财产和健康损失。尤其是H9N2 亚型流感病毒，其活动十分 猖獗。流行病学和遗传学研究表明，该亚型的流感病毒具有广泛的地理和宿主分 布，而且在人群中有较高的隐性感染率。最近在香港和广东地区的人群中又相继 分离到H9N2 亚型流感病毒，表明H9N2 亚型流感病毒很可能成为诱发下次人类 大流感的病毒株。因此我们必须对该亚型的流感病毒进行严密的监测，为可能的 大流感暴发做准备。华南地区近年来的工业化进程加快，野鸟家养化导致许多新 种群的形成和流感病毒生态系统的改变。在这些新形成的流感病毒易感种群中， H9N2 亚型的流行情况至今未有研究。本课题意在： 1、 以Pa 和Cu 为代表，探讨H9N2 亚型流感病毒在这些新形成的小 种群中的流行情况； 2 、 探讨这些小种群中流感病毒的来源：是从其它动物跨种属传递而 来，还是本身为流感病毒的天然宿主； 3、 探讨这些新形成种群中H9N2 亚型流感病毒的进化情况，以及其 在整个流感病毒生态体系中的作用； 材料和方法： 每周采集标本一次，常规处理后，接种于9-11日龄鸡胚尿囊腔，35℃恒温培 养72小时，收取鸡胚尿囊液。血凝阳性（AD≥16）且细菌培养阴性标本进一步做 HI和NI实验以鉴定亚型，标本保存于-80℃箱。从中选取18株H9N2病毒代表株进 行下一步的分子生物学工作。用Qiagen的RNeasy RNA试剂盒提取病毒RNA后，逆 3 万方数据 转录合成cDNA。 以之为模板，用针对不同基因片段设计的特异性引物，进行PCR 反应扩增。以PCR纯化试剂盒纯化PCR产物，然后进行测序反应。测序在在DNA测 序仪（377）上进行。用GCG 10.2编辑和处理基因序列。用PAUP 4.1进行进化树 分析。在GeneDoc 2.3上进行序列比较和同源性分析。 结果： 1、以Pa、Cu 为代表的小种群禽类中，H9N2 亚型常年流行； 2、抗原学分析结果表明，这些病毒株都属于Y280 系列，与G9 和SW9 抗原 性相似，而与anti-G1 和anti-1073 反应性低； 3、进化树分析表明，这些基因型与同期同地在水禽中分离到的基因型具有 很高的同源性； 4、基因型分析表明，有多个H9N2 基因型存在，在这些新种群中经历复杂的 筛选，某些基因型已趋于稳定； 讨论： 1、 以PA、CU 为代表的小种群禽类是流感病毒的天然宿主—基因储存库， 还是流感病毒的中间宿主； 2、 仅有Y280 系列H9N2 亚型被检测到，未发现G1 系列，这是否意味着 这些新种群对Y280 具有更高的易感性； 3、 多个基因型存在，这些重配病毒株产生的中间宿主—水禽还是这些小 种群陆地禽类； 4、 这些基因型在同期也从水禽中分离到，它们是由水禽经跨种属传递传 4 万方数据 播给陆地禽类，还是反向传播的结果； 5、 众多的基因型在小种群禽类中经过快速的筛选，大多很快地消失，但 也有少数基因型已经趋于稳定，这些基因型的进化情况； 6、 这些小种群禽类群体的形成对流感生态体系的影响； 关键词: 甲型流感病毒；H9N2 亚型；流行病学；流感世界大流行