第四章 工业微生物分离与筛选.ppt

第四章 工业微生物  分离与筛选;本章内容;定方案：首先查阅资料，了解所需菌种的生长培养特性。 采样：有针对性地采集样品。 增殖：人为地通过控制养分或培条件，使所需菌种增殖培养后，在数量上占优势。 分离：利用分离技术得到纯种。 发酵性能测定：进行生产性能测定。这些特性包括形态、培养特征、营养要求、生理生化特性、发酵周期、产品品种和产量、耐受最高温度、生长和发酵最适温度、最适pH值、提取工艺等。;（一）菌种的来源 根据资料直接向有科研单位、高等院校、工厂或菌种保藏部门索取或购买； 从大自然中分离筛选新的微生物菌种。 ;新菌种的分离是要从混杂的各类微生物中依照生产的要求、菌种的特性，采用各种筛选方法，快速、准确地把所需要的菌种挑选出。 实验室或生产用菌种若不慎污染了杂菌，也必须重新进行分离纯化。 ;第一节 含微生物样品的采集;地理条件 季节条件：以温度适中，雨量不多的秋 初为好。 ;二、根据微生物生理生化类型采样 1、根据微生物营养类型采样 自养型、异养性（碳源不同） 2、根据生理特性采样 温度敏感型、氧敏感性、渗透压敏感型、酸碱型等 3.特殊环境下采样：极端微生物 ;三、采样方式;水田等浸水土壤在不损土层结构的情况下插入圆筒采集。或可取离地面5～15cm处的土。 在采集植物根际土样时，一般是自土壤中慢慢拔出植物根，在无菌水中浸渍约20min，洗去粘附在根上的土壤，然后再用无菌水漂洗下根部残留的土，这部分即为根际土样。 采集工具：样本采集时所需的工具通常 有无菌刮铲、土样采集器、镊子、解剖 刀、手套、无菌小塑料袋和塑料瓶等。;（2）植物体采集; （3）水样采集;四、采样的注意事项;1、营养成分;从自然界中分离培养微生物是菌种选育的重要和基础的步骤。 在任一试样中所存在的微生物仅为极少数特定种类的菌株；所以筛选过程中，应及时调整检测方法，以与各种不同类型的生长和代谢之微生物相适应。 ;一、对工业微生物的基本要求;1 在短时间内可获得目的产物——3天或更短。2 菌株的自我保护及采取措施:降低pH高温生长3 目的产物多，且在多组分中易分离。;二、含微生物样品的富集培养; 从产物角度;1、生态学方法用于培养分离中; 根据上述5项中所获得的数据，设计分离方法，即选择适宜的稀释液、底物、试样、天然浸出汁和培养条件； 用标准方法作对照来评价分离方法，根据待检材料的生态参数需要，修改已知的方法； 运用特定的富集方法，富集那些可能具有筛选意义的微生物类群。;2、生态学参数及培养基的组成原则;1 分离培养微生物的常规操作;2 采样分离方法;（2）从检样分离;E;3 微生物的接种培养方法;加还原剂（p72) 加入半胱氨酸、维生素C、硫化钠等 焦性没食子酸法 平皿厌氧培养法 试管厌气培养法 玻璃板隔绝空气培养法 生物吸氧法;（2）厌氧菌的稀释转动分离培养法;4 纯化分离菌种的方法;第四节 有用微生物的筛选;（一）初 筛;筛选方法;4 各种抗生素产生菌的初筛;（2）各种抗生素产生菌的初筛; （二） 复 筛;1、微生物初筛鉴定 对初筛菌株进行分类——何属？何种？ 目的：预知微生物对人、动物或植物是 否有致病性。 或进行毒理实验，最短3月，长达 2-5年 但分类复杂。以前轻易不作。 ;;3 培养与发酵;??3）玻璃自控发酵罐 容量5～50L。是摇床向发酵罐的过渡阶段。 目的：工艺参数、工艺条件的选择和考察。;发酵试验的四个阶段;4 抽提试验;例：新抗生素的抽提试验;例：聚?-羟基丁酸酯及其共聚物P83;五、毒性试验及性能鉴定;