实验6 噬菌体噬斑观察.pptVIP

微生物学教研室 郭棵棵 （验证性实验） 操作： 1、肠道菌的分离与鉴定（三） （接种半固体、蛋白胨水、尿素、斜面） 2、噬菌体培养（平板法） 材料： 1、半固体、蛋白胨水、尿素、斜面 各1支/人 2、普通平板 1块/3人 3、菌种及噬菌体标本 各1支/6人 实验内容 录像：厌氧菌的分离与鉴定 上次课结果观察 了解： 厌氧菌的分离鉴定方法 噬菌体的生物学特点 掌握： 噬菌体培养的方法和意义 [ 教学目标 ] 重点： 噬菌体培养的操作方法 难点： 噬菌体培养的操作方法 [ 重点难点 ] 上次结果观察 克氏双糖铁培养基培养结果观察： 部分培养基高层变黄，斜面维持原有红色； 部分培养基高层、斜面均变为黄色； 有的培养基不光有颜色变化，还出现气泡或裂隙； 有的培养基出现黑色物质。 Why？ 葡萄糖、乳糖： 可被细菌分解产酸产气，通常将培养基的高层的颜色改变代表葡萄糖，斜面代表乳糖。 蛋白胨：细菌分解可产生H2S硫酸亚铁：与H2S结合形成FeS黑色沉淀酚红指示剂: pH范围6.8-8.4 (酸黄碱红) 克氏双糖铁培养基（复习） 克氏双糖培养基培养结果判断 分解葡萄糖乳糖产酸产气： —— 高层、斜面均变黄 —— 培养基出现气泡、裂隙 未产生H2S：无黑色FeS出现 分解葡萄糖：高层变黄 不分解乳糖：斜面仍为红色 不产气：无气泡、裂隙出现 未产生H2S：无黑色FeS出现 大肠杆菌 痢疾杆菌 分解葡萄糖：高层变黄 不分解乳糖：斜面红色 产气：培养基出现气泡、裂隙 产生H2S：出现黑色FeS 甲型副伤寒杆菌 乙型副伤寒杆菌 分解葡萄糖：高层变黄 不分解乳糖：斜面红色 产气：培养基出现气泡、裂隙 未产生H2S：无黑色FeS出现 分解葡萄糖：高层变黄 不分解乳糖：斜面红色 产生H2S：出现黑色FeS 不产气：培养基无气泡、裂隙出现 伤寒杆菌 标本 脓血便、肛拭子 选择/鉴别培基 生化反应 血清学鉴定 半固体,蛋白胨水,尿素培养基，斜面 S.S平板，KIA 玻片凝集试验 肠道菌分离鉴定步骤（续） 操作 取克氏双糖铁培养基斜面上的菌苔，分别接种 半固体培养基观察细菌有无动力。 蛋白胨水培养基用于观察细菌能否分解色氨酸产生靛基质。 尿素培养基是根据酚红指示剂变色来判断细菌是否分解尿素产碱。 斜面培养基是为下一次血清学鉴定提供菌种。 肠道菌分离与鉴定（三） （接种半固体、蛋白胨水、尿素、斜面） 操作一 半固体培养 —— 动力试验 （氯化三苯四氮唑）加入指示剂 TTC 肠科杆菌动力试验结果： 大肠埃希菌阳性？阴性？ 痢疾志贺菌阳性？阴性? 伤寒沙门菌阳性？阴性？ 用于检查细菌是否具有鞭毛，能否运动？ 蛋白胨水培养 —— 吲哚（indol）试验 色氨酸 吲哚 对位二甲基氨基苯甲醛 玫瑰吲哚 红色 靛基质指示剂 肠科杆菌吲哚试验结果： 大肠埃希菌阳性？阴性？ 变形杆菌阳性？阴性？ 痢疾志贺菌阳性？阴性? 伤寒、副伤寒阳性？阴性？ 检测细菌是否分解色氨酸产生吲哚（靛基质）？ + — 变形杆菌 → 尿素 → 氨 红色 + 酚红 尿素酶试验 尿素酶试验结果 检测细菌是否产生尿素酶，分解尿素产氨？ （酚红颜色改变：酸黄碱红） 肠科杆菌尿素酶试验结果： 大肠埃希菌阳性？阴性？ 变形杆菌阳性？阴性？ 痢疾志贺菌阳性？阴性? 伤寒、副伤寒阳性？阴性？ 操作二 噬菌体培养 噬菌体（Bacteriophage）是一类能感染细菌、放线菌、螺旋体、支原体和真菌等微生物的病毒。 （1）个体微小，能通过除菌滤器； （2）结构简单：核酸+蛋白； （3）种类繁多，分布广泛； （4）专性细胞内寄生； （5）严格宿主特异性。 生物学特点： 蛋白质外壳 核酸：DNA or RNA 尾领 尾髓 尾鞘 尾板：含溶菌酶 尾刺 尾丝：粘附功能 头部 尾部 在电镜下，呈蝌蚪形，微球形及细杆形三种形态。 噬菌体的形态与结构 蝌蚪形噬菌体 毒性噬菌体（virulent phage）：感染宿主菌后，能在宿主菌细胞内独立复制增殖，产生许多子代噬菌体，并最终裂解宿主菌的噬菌体。 （1）毒性噬菌体与溶菌反应 固体培养基：形成称为噬斑（Plaque） 溶菌反应的结果： 液体培养基：菌液由混浊变清亮。 噬菌体的分类 噬斑（plaque）：噬菌体和宿主菌在固体培养基上共同培养后形成的透明或半透