如何从-80℃冻存的抗凝全血中提取RNA.docVIP

如何从-80℃冻存的抗凝全血中提取RNA 众所周知，RNA容易降解，所以一般提取RNA都会使用新鲜的样本，如果新鲜样本不能立即提取RNA，应立即放到-80℃冻存。 但关键是血液中的红细胞不含有RNA，提供RNA的主要是白细胞，市面上主要的血液RNA提取试剂盒（比如QIAGEN）用到的原理是将白细胞与其它组分分离（用红细胞裂解液去除红细胞）再提取其中的RNA。 一旦血液经过冷冻就会出现溶血现象，这时所有的细胞都发生破裂，已经无法分离白细胞了，使用这种方法自然也就提不到RNA。 表一 从表一的数据上可以看出两种方法处理的抗凝血经过75天的长期保存后均提取出了RNA，且浓度并无太大差异。 实验结果二--血液RNA电泳 在1%的琼脂糖凝胶上，加入8 μl血液RNA，电泳15 min，结果如下， 图一：琼脂糖凝胶电泳图 M：DL 2000 Ladder DNA Marker 1、2：500 μl冷冻抗凝全血提取的RNA 3、4：500 μl抗凝全血加1 ml Buffer L9预先混合后提取的RNA 从图一所示的电泳图中可以看出，四个样本的电泳条带都很清晰。 实验结果三--荧光定量PCRβ-actin基因检测结果 荧光定量PCRβ-actin基因检测结果如下， 图二：RT-PCR曲线（Delta Rn vs Cycle） 阳性：血液总RNA（50 ng/μl） 1、2：500 μl冷冻抗凝全血中提取的RNA 阴性：无菌超纯水 3、4：500 μl抗凝全血加1 ml Buffer L9预混对按照 从图二可以看出，两组不同处理的冷冻全血中提取的RNA经逆转录后获取的cDNA在RT-PCR检测中几乎与阳性同时起线，且Ct值较靠前。 总结 从本次实验可以得出结论： 由于Simgen全血总RNA试剂盒可以从血液中直接分离纯化总RNA，不需事先分离白细胞，自然也不怕冷冻血液溶血。 本次实验测试，一次可以从500 μl -80℃贮存75天的冷冻全血中提取到3 μg左右的血液总RNA，且纯度很高，完全满足后续基因检测的需要。 最后： 1. 在-80℃冻存的抗凝全血，如果用Simgen全血总RNA纯化试剂盒提取RNA则结果影响不大。 2. 抗凝全血在-80℃冻存时间小于75天的，提取到的RNA尚未观察到有严重的降解。 3. 解冻后的抗凝全血立即用Simgen全血总RNA纯化试剂盒提取RNA，即使不加RNA酶抑制剂，RNA也不会被降解。 说明：simgen原创文章，如需转载请注明来源出处 杭州新景生物试剂开发有限公司新景生物实验室