用于PCR检测的枣中霉菌DNA提取条件优化.docxVIP

·论著·用于 PCＲ 检测的枣中霉菌 DNA 提取条件优化郝莉花1 ，蒋祎丽1 ，纵伟2 ，吴晓宗21．河南省产品质量监督检验院，河南郑州450000;2．郑州轻工业学院食品与生物工程学院，河南郑州450002摘要:目的提取霉变红枣中霉菌DNA，研究其适宜的提取条件。方法采用氯化苄提取方法，以DNA浓度为指标，从提取溶剂pH、提取时间和氯化苄加入量3个方面对DNA的提取条件进行研究，在单因素实验的基础上，采用正交实验进行优化。结果氯化苄提取红枣中霉菌DNA的最佳条件为:提取溶剂pH=8．8，提取时间为55min，氯化苄量为320μl。各因素对CDNA影响的次序为:提取溶剂pH＞提取时间＞氯化苄量。方差分析表明，提取溶剂pH在所考察的范围内对CDNA影响显著，而提取时间和氯化苄量对CDNA在所考察的范围内影响不显著，最佳提取条件下，CDNA平均值为20．11μg/ml。结论应用氯化苄法提取枣中真菌DNA，不需要添加蛋白酶消解蛋白质，也不需要氯仿、苯酚等抽提蛋白质，且破壁与DNA提取可同时进行，方法简单、效率高，是检测霉变红枣中真菌的适宜方法。关键词: 聚合酶链式反应; 霉菌; 脱氧核糖核酸;提取中图分类号:Q939．5文献标识码:A文章编号:1004－8685(2014)21－3050－03Optimization of DNA extracting conditions for detection of mould in jujubeHAO Li － hua* ，JIANG Yi － li，ZONG Wei，WU Xiao －zong* HenanProvincialCenteforProductQualitySupervisionandInspection，Zhengzhou450000，ChinaAbstract:ObjectiveToextractmouldDNAinjujubeandstudyitssuitableparameter．MethodsThemouldDNAwasex-tractwithbenzylchloridebyDNAconcentrationasindex，theeffectofextractionconditions(pH，timeandbenzylchloridead-dition)onextractparameterswerestudied．Basedonsignalfactortest，orthogonaltestwasusedtooptimumextractconditions．ＲesultsTheoptimumextractionconditionswereasfollows:pH8．8，time55minandbenzylchlorideaddition320μl．TheorderofthefactorsinfluenceonCDNAwerepH＞time＞benzylchlorideaddition．VarianceanalysisshowedthatpHhassignifi-canteffectsonCDNAintheinvestigationscope，timeandbenzylchlorideadditionhasnotsignificanteffectsonCDNAintheinves-tigationscope．CDNAwas20．11μg/mlintheoptimumextractconditions．ConclusionBenzylchloridemethoddontneedtoaddproteasetodigestionofprotein，dontneedtoaddchloroformandphenoltoextractprotein．Moreover，wall－breakingandDNAextractioncanbemadeatthesametime．ThismethodwasasimpleandeffectivemethodforextractingDNAfrommouldinjujube．Key Words: Polymerase chain reaction( PCＲ) ; Mould; DNA; Extraction红枣营养丰富，深受广大消费者喜爱，但红枣在贮藏过程中，易 发生霉变。霉变红枣主要是由青霉菌、白曲霉和米曲霉等真菌引起的［1 － 2］，霉变红枣中真菌在代谢过程中会产生毒素，具 有 致 癌、致 畸 作用［3 － 4］。用传统的真菌培养法检测，耗时长，无法实现快速检测的目的，PCＲ 技术在微生物的检测方面具有明显优势［5－6］，因此，研究如何采用PCＲ检测红枣中真菌，对预防和控制食品安全事件的发生，具有重要的现实意