李斯特菌的致病机理.pptVIP

1、PrfA的结构 PrfA (Positive Regulatory Factor A)蛋白是由LM毒力岛中的PrfA基因编码，分子量为27 kDa。PrfA的N端区由一个β-转角和一个α-螺旋构成，中间为铰链区，C端区具有结合DNA的螺旋-转角-螺旋结构。PrfA 还具有两个独特的结构域：功能未知N末端螺旋-转角-螺旋基序 (HTH motif) 以及 C末端的亮氨酸拉链区(leucine zipper motif )。 预防控制 单增李斯特氏菌在一般热加工处理中能存活，热处理已杀灭了竞争性细菌群，使单增李斯特氏菌在没有竞争的环境条件下易于存活，所以在食品加工中，中心温度必须达到70℃持续2分钟以上。 单增李斯特氏菌在自然界中广泛存在，所以即使产品已经过热加工处理充分灭活了单增李斯特氏菌，但有可能造成产品的二次污染，因此蒸煮后防止二次污染是极为重要的。 由于单增李斯特氏菌在4℃下仍然能生长繁殖，所以未加热的冰箱食品增加了食物中毒的危险。冰箱食品需加热后再食用。 Thank You! MR-VP试验 ①原理：葡萄糖→丙酮酸→大量混合酸→pH4以下→（+甲基红指示剂）→培养基变红 V-P试验：葡萄糖→丙酮酸(脱羧)→乙酰甲基甲醇(强碱+V-P试剂)→二乙酰(胍基)→培养基变红 ②培养基：磷酸盐葡萄糖胨水培养基 ③方法： 接种MR-VP肉汤，35℃培养48h。 移取1ml于洁净试管，加入5％ α－萘酚溶液6ml， 再加入40％氢氧化钾溶液0.2ml，轻摇1min，静置20min VP-阳性反应：红色 剩余培养液继续培养2d， 加入甲基红指示剂5滴。 MR-阳性反应：红色 ④结果MR-VP：+/+ 缓冲葡萄糖蛋白胨水(MR 和 VP 试验用) 成分 多胨 7.0 g 提供氮源、维生素和生长因子 葡萄糖 5.0 g 可发酵糖类 磷酸氢二钾 5.0 g 缓冲剂 蒸馏水 1 000 mL pH 7.0 制法 溶化后调节pH，分装试管，每管1 mL，121 ℃高压灭菌15 min，备用。 质控菌株 菌株编号 生长情况 MR试验培养特征 VP试验培养特征 大肠埃希氏菌 ATCC25922 良好 培养基变红 无红色 产气肠杆菌 CMCC(B)45301 良好 培养基颜色不变 10-20min内显红色 糖发酵试验： 将TSB—YE肉汤培养物分别接种于0.5％葡萄糖、麦芽糖、七叶苷、甘露醇、鼠李糖、木糖发酵管内，于35℃培养24～48h，阴性继续培养到第5天，李斯特氏菌产酸不产气。 葡萄糖：阳性 麦芽糖：阳性 七叶苷：阳性 甘露醇：阴性 鼠李糖：阳性 木糖：阴性 糖发酵管 成分 牛肉膏 5.0 g 提供氮源、维生素和生长因子 蛋白胨 10.0 g 提供氮源、维生素和生长因子 氯化钠 3.0 g 维持均衡的渗透压 磷酸氢二钠 2.0 g 缓冲剂 0.2 %溴麝香草酚蓝溶液 12.0 mL pH指示剂（酸→黄，碱→蓝） 蒸馏水 1 000 mL 制法 葡萄糖发酵管按上述成分配好后，按0.5 %加入葡萄糖,分装于有一个倒置小管的小试管内，调节pH至7.4，115 ℃高压灭菌15 min，备用。 其他各种糖发酵管可按上述成分配好后，分装每瓶100 mL，115 ℃高压灭菌15 min。另将各种糖类分别配好10%溶液，同时高压灭菌。将5 mL糖溶液加入于100 mL培养基内，以无菌操作分装小试管。 试验方法 取适量纯培养物接种于糖发酵管，36 ℃±1 ℃培养24