UPLC_MS_MS测定人血浆中瑞格列奈含量的不确定度评定.docxVIP

现代测量与实验室管理2014 年第 3 期文章编号:1005-3387(2014)03-0031-34UPLC-MS / MS 测定人血浆中瑞格列奈含量的不确定度评定乔湜王妍李清艳王伟刘永锁( 中国民用航空局民用航空医学中心( 民航总医院),北京100123)摘 要:评定超高效液相色谱-质谱联用法( UPLC-MS / MS) 测定人血浆中瑞格列奈含量的不确定度。 同时依据不确定度 评定的指导性文件,从测定程序分析不确定度的来源,量化不确定度分量,计算检测结果的合成标准不确定度和扩展不确 定度。关键词:测量不确定度;UPLC-MS / MS;瑞格列奈中图分类号:O657． 63文献标识码:A0引言瑞格列奈是一种非磺脲类促胰岛素分泌的降糖机( 德国); 赛多利斯 BT25S 十万分 之 一 天 平 ( 德 国);漩涡混匀器。1． 2UPLC-MS / MS 条件药,属于氨基乙酰基苯甲酸衍生物[1-3] 。 近年来有ACQUITY UPLC HSS C18柱 ( 150mm × 2． 1mm,关于此药致低血糖[4] 、过敏反应[5-6] 、全身紫癜[7] 及 肝损害[8] 等不良反应常有报道。 高效液相色谱质 谱法( HPLC-MS / MS) 具有灵敏度高、专属性强等优 点,用于瑞格列奈血药浓度监测[9-10] ,但尚未见有关 瑞格列奈不确定评估的报道。 由于测定结果具有不 确定度且不可避免,同时监测结果的准确性直接关 系到临床用药的合理性及可避免不良反应发生。 本 实验室采用 超 高 效 液 相 色 谱 质 谱 法 ( UPLC - MS / MS) 对患者所服用的瑞格列奈进行血药浓度监测, 依据 CNAS-GL06 《 化学分析中不确定度的评估指 南》 和 JJF1059 -1999《 测量不确定度评定与表示》 识 别不确定度来源,分析不确定度分量对测量结果的 影响,计算不确定度分量和合成不确定度,为控制检 测过程中影响检测结果的因素提供依据,同时为生 物样本中此类药物含量测定结果不确定度的评定提 供参考。1 材料与方法1． 1 试剂与仪器1) 瑞格列奈对照品( 纯度≥98% ,Sigma);厄贝 沙坦对照品( 纯度≥98% ,中国药品食品检定研究 院);乙腈( GR);乙酸铵( GR);甲酸( 优级纯);去离 子水由超纯水仪( Millipore 纯水系统) 制备。2) 超高效液相色谱 / 三重四级杆质谱仪( TQD UPLC-MS / MS,美国沃特斯有限公司);可调移液器 ( 法国吉尔森);SIGMA 3 -18K 型台式高速冷冻离心1． 8 μm);流动相:含 0． 1 % 甲酸的 5mM 乙酸铵水 溶液与含 0． 1% 甲 酸 的 乙 腈 溶 液 ( 40 ∶ 60 ), 流 速 0． 2mL / min;柱温 25℃ ;离子源:电喷雾离子源,离子 源温度 120℃ ;去溶剂化温度 350℃ ;正离子方式检 测;扫描方式: 多反应监测( MRM); 液氮气体流速 650L / hr,毛细管电压( capillary) 3． 0kV;瑞格列奈的 锥孔 电 压 ( Cone Voltage) 分 别 为 30V; 碰 撞 能 量 ( CE) 分别 30V;用于瑞格列奈定量分析检测的离子 对为:母离子 m / z435． 3 和子离子 m / z230． 2。1． 3 制样及分析取空白血浆 200μL,置于 1． 5mL EP 管中,加入 浓 度 为 0． 274μg / mL、 0． 547μg / mL、 1． 368μg / mL、 2． 736μg / mL、4． 104μg / mL、 5． 472μg / mL 的 瑞 格 列 奈工作液 10μL,然后加入 10μL 浓度为 1μg / mL 的 厄贝沙坦工作液,混匀,再加入 600μL 乙腈( 含 1‰ 甲酸),涡旋混合 1min,12000rpm 离心 10min, 取上 清液供检。 标准曲线每个浓度点制备样品 3 份。待检 样 品 3000rpm 离 心 5min, 取 空 白 血 浆200μL,加入 厄 贝 沙 坦 工 作 液 10μL, 混 匀, 再 加 入600μL 乙腈( 含 1 甲酸‰), 涡旋混合 1min,13201g 离心 10min,取上清液供检重复做 4 份,建立瑞格列 奈标准曲线。2 测量不确定度评定2． 1 数学模型校准曲线的回归方程为:Y = bX+a式中,Y 为瑞格列奈峰面积与厄贝沙坦峰面积 比值;X 为血药浓度, μg / mL; a 为截距; b 为斜率。 所以数学模型为X = Y-a+δ +δ +……( V1 ):由容量瓶、 环境温度对定容体积影响和定容 体积重复性引入。1) 容量瓶影响 u校准 ( V1 )