熟悉薄层色谱.PPT

5．显色装置 喷雾瓶 浸渍槽 蒸气熏蒸 ----双槽展开缸 6．检视装置 紫外分析仪(三用) 摄像设备 薄层色谱扫描仪(CS9301型） 四、操作技术 1．薄层板制备 自制薄层板 市售薄层板 无黏合剂 分类 含黏合剂 10%～15%煅石膏 0.2%～0.5%羧甲基纤维素钠水溶液 操作方法 普通薄层板(玻璃、聚酰胺薄膜和铝基) 高效薄层板（固定相粒径为5~7 ） 分类 操作方法 临用前一般应在110℃活化30分钟。聚酰胺薄膜不需活化。铝基片薄层板和聚酰胺薄膜可根据需要剪裁 操作方法 将1份固定相和3份水（或羧甲基纤维素钠水溶液）在研钵中沿同一方向研磨混匀，去除表面的气泡后，置玻璃板上使涂布均匀，或倒入涂布器（见图8-14）中，在玻板上平稳地移动涂布器进行涂布(涂层厚度为0.2mm～0.3 mm)，取涂好的薄层板，置水平台上于室温下晾干后，在110℃活化30分钟，立即置于有干燥剂的干燥器中备用 。 手动涂布器 2．点样 普通板 点样基线----距底边2.0cm 圆点状----　R≤3mm 条带状-----宽度5～10mm 点或条带间距----＜8mm 点样量---- ＜10 高效板 点样基线----距底边0.8~1cm 圆点状----　R≤2mm 条带状-----宽度4～8mm 点或条带间距----＜5mm 点样量---- ＜5 3. 展开 （1）展开要求 查阅 A.何为边缘效应?何因?如何防止? B.展开剂加入量?展开剂展开距离? （2）展开方式 上行 近水平 双向 多次 上行展开 近水平展开 4．检视 有色物质斑点----目光检视 无色物质斑点 荧光检出法 化学检出法 五、检测技术 1．系统适用性试验 检测灵敏度 比移值 分离效能 2．鉴别 等浓度对照法----同板---大致同位、同大、同色泽 等体积混合法----斑点单一、紧密 结构相似对比法-----Rf不同或两斑点 3．杂质检查 杂质对照品法 样品溶液的自身稀释对照法 二者合用法 4．定量方法 （1）目视比色法 -----半定量法（精度±10%） （2）斑点洗脱法 （3）薄层扫描法(正在减少使用) 第4节 纸色谱分离技术 一、分离原理(液-液萃取 ) 利用样品中不同组分在两相溶剂中溶解性（或分配系数）不同，当流动相携带样品流经固定相（被吸附或固定在惰性材料上的液体）时，各组分在两相间不断进行溶解、萃取、再溶解、再萃取，……，样品经过多次反复分配后，造成分配系数稍有差异的组分移行的距离不同面实现分离 . 二、仪器与材料 1．色谱滤纸 想一想:色谱滤纸如何选择? 2．展开剂 （1）纸色谱固定相一般是什么? （2）纸色谱展开剂如何选择? 3．展开容器 圆形或长方形玻璃缸，缸上具有磨口玻璃盖且能密闭 下行纸色谱展开缸 三、操作技术 1．色谱滤纸的准备 （1）用于下行法的色谱滤纸 （2）用于上行法的色谱滤纸 2．点样 样品溶解于适宜的溶剂中制成一定浓度的溶液。用定量毛细管或微量注射器吸取溶液，点于点样基线上，溶液宜分次点加，每次点加后，俟其自然干燥、低温烘干或经温热气流吹干，点样直径为2 mm～4mm，点样量取决于色谱滤纸的薄厚程度和显色剂的灵敏度，一般几到几十微克。点间距离约为1.5cm～2.0cm，样点通常为圆形，也可点成条形。 3．展开 纸色谱下行展开 纸色谱上行展开 4．斑点定位 纸色谱法斑点的定位基本和薄层色谱法相似，但纸色谱法不能使用腐蚀性显色剂，也不能在高温下显色。 运用纸色谱进行药物的鉴别、检查和含量测定的方法、要求与薄层色谱法一致 第5节 应用案例 一、柱色谱法的应用案例 案例8-1 黄芪含量测定中样品溶液的制备 1.黄芪中主要活性成分是什么?如何提取和纯化? 2.提取液用氨试液洗涤的目的是什么? 3.D101水洗和40%乙醇液洗脱液为何弃去? 二、薄层色谱法应用案例 案例8-2 六味地黄丸中牡丹皮的鉴别 1.牡丹皮 的鉴别指标是什么?鉴别原理是什么? 2.为何选择环己烷-乙酸乙酯（3:1）为展开剂 ?显色方式是什么? 3．鉴别结果 六味地黄丸薄层色谱图（1.丹皮酚；2~5.六味地黄丸） 案例8-3 甲苯咪唑中有关物质检查 1.TLC法检查杂质常用有哪些方法? 2.检查中为何采用硅胶GF254? 3.甲苯咪唑中有关物质的限度是多少？ 第8章 经典色谱分离实用技术 学习目标 知识目标 掌握吸附薄层色谱和纸色谱分离原理、常用分离参数和系统适用性指标；熟悉经典柱色谱、薄层色谱和纸色谱操作方法；了解色谱的分类和吸附薄层色谱、纸色谱、经典柱色谱的色谱条件选择原则。 技能目标