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儿科学专业优秀论文 中药止泻液对鼠轮状病毒肠炎肠道水通道蛋白影响的研究 关键词：轮状病毒 肠炎 水通道蛋白 中药止泻液 摘要：目的: 1.轮状病毒性肠炎动物模型的建立； 2.轮状病毒性肠炎肠道水通道蛋白的改变； 3.中药止泻液对轮状病毒性肠炎肠道水通道蛋白的影响。 材料与方法: 1.研究对象:清洁级昆明种乳鼠，由中山大学实验动物中心提供。 2.轮状病毒:人轮状病毒于2007年11月取自广州市儿童医院门诊诊断为轮状病毒感染患儿的粪便。猴轮状病毒（SA11株）由中国协和医科大学生物学研究所馈赠。 3.轮状病毒性肠炎动物模型的建立:腹泻组（B组）每只乳鼠分别用150ul含1×104TCID50轮状病毒液灌胃；空白组（A组）用冻融离心后的不含轮状病毒的细胞培养物150ul向乳鼠灌胃。 4.中药止泻液干预模型的建立:C，D组乳鼠分别于接种轮状病毒后第24小时，第48小时给予灌注止泻液（1.86g/ml），每日三次，每次50ul。 5.取材:分离乳鼠肠段（空肠，回肠，结肠），标记后置于液氮保存。 6.实时荧光定量PCR对肠道水通道蛋白的mRNA作定性与相对定量，由于mRNA经过表达后成为蛋白质，两者成正比关系，所以可以通过mRNA推测蛋白质的性质与数量。 1）肠道组织总RNA的提取； 2）对总RNA行逆转录反应； 3）实时荧光定量PCR检测肠道水通道蛋白1，3，4，8mRNA。 7.结果用SPSS11.0统计软件分析。 结果： 1.轮状病毒性肠炎动物模型 乳鼠感染SA11株第2天后出现明显的临床腹泻症状，至少在感染后连续6天动物大便中可检测到较高滴度的轮状病毒（RV）抗原；乳鼠感染人轮状病毒后，连续观察6天均未出现腹泻症状，动物大便中亦未检测到RV抗原。 2.中药止泻液干预模型 干预组（C组）乳鼠在接种病毒液后48h，其中4只乳鼠出现明显的RV感染症状，主要表现为腹泻（淡黄色水样便），腹泻率为33％，喂毒后第3，4天，4只腹泻乳鼠临床症状减轻，表现为排黄色糊状便，肠外症状不明显。接毒后第5至7天，乳鼠均无腹泻，排黄色成形便。 干预组（D组）乳鼠在接种病毒液后48h，10只乳鼠均出现明显腹泻症状（淡黄色水样便），腹泻率为100％，接毒后72h，乳鼠腹泻程度减轻，接毒后第4，5天乳鼠排黄色糊状便，接毒后第6，7天，乳鼠无腹泻，排黄色成形便。 3.实时荧光定量PCR结果 1）空白组乳鼠空肠，回肠和近端结肠肠道黏膜均有水通道蛋白1，3，4，8mRNA的表达； 2）空肠AQP8mRNA在腹泻组乳鼠中表达量显著高于空白组； 3）回肠AQP1mRNA在腹泻组中表达显著低于空白组； 4）在空肠，回肠中，腹泻组与空白组其余水通道蛋白mRNA表达量无统计学差异； 5）结肠，腹泻组与空白组AQP1，3，4，8mRNA表达无统计学意义； 6）C与D组空肠组织中，4种水通道蛋白mRNA表达量与空白组无明显差异； 7）C与D组回肠组织中，4种水通道蛋白mRNA表达量与空白组无明显差异； 8）C与D组结肠组织中，AQP1mRNA表达明显比空白组上升，两组差异有统计学意义；其余AQP3，4，8mRNA表达量C，D组与空白组无明显差异。 结论： 1.昆明乳鼠对SA11株易感，对人轮状病毒不易感。 2.腹泻组乳鼠空肠AQPSmRNA表达上升，提示AQP8参与肠道水的吸收与分泌，代偿性表达增加，可以减轻乳鼠腹泻症状。 3.腹泻组乳鼠回肠AQP1mRNA表达下降，提示随着AQP1减少，回肠吸收功能障碍，水吸收量减少，导致粪便稀薄形成水样便。 4. AQP8mRNA表达量增加不及AQP1mRNA表达量减少的程度，使腹泻组乳鼠仍以水样便为主要表现。 5.轮状病毒肠炎的致泻机制可能与近端结肠AQP1，3，4，8无关。 6.中药干预组（C，D组）乳鼠结肠AQP1mRNA表达上升，提示中药液能明显提高乳鼠结肠组织AQP1mRNA的表达，可能通过增加结肠对水分的吸收，来达到收敛止泻的作用。 7.在本研究中，中药液对轮状病毒肠炎乳鼠肠道AQP3，4，8没有明显的影响。 8.中药在不同时间点喂予轮状病毒肠炎乳鼠，对肠炎乳鼠的病程有影响，在接毒后第24小时喂服中药止泻液，药效较好，可使乳鼠腹泻率下降（C组腹泻率为33％；D组腹泻率为100％）。同时可使轮状病毒肠炎病程缩短（C组腹泻病程为0-3天，D组腹泻病程为2-4天）。 正文内容 目的: 1.轮状病毒性肠炎动物模型的建立； 2.轮状病毒性肠炎肠道水通道蛋白的改变； 3.中药止泻液对轮状病毒性肠炎肠道水通道蛋白的影响。 材料与方法: 1.研究对象:清洁级昆明种乳鼠