[14秋]C22 免疫学检测技术与基本原理.pptVIP

L/O/G/O * 第二十二章 免疫学检测技术 * 免疫学检测技术的基本原理 体外抗原抗体结合反应的特点及影响因素 体内：抗原+抗体→免疫反应 体外：抗原+抗体→进行检测 检测抗原或抗体的体外实验(血清学实验） 凝集反应 沉淀反应 免疫标记技术 蛋白质芯片技术 免疫细胞功能的检测 * 第一节 体外抗原抗体反应的特点及影响因素 （一）抗原抗体反应的特点 1. 高度特异性 2. 表面化学基团之间的可逆结合（可逆性） 3. 适宜的抗原抗体浓度和比例（比例性） 4.抗原抗体反应的两个阶段 ①抗原抗体特异性结合阶段 ②可见反应阶段 * 1.高度特异性 抗原抗体反应物质基础是抗原表位(决定簇)与抗体CDR的互补结合(相互吻合，具有互补性)。 * 抗原和抗体的结合是互补性的特异性结合。通过非共价键结合。 2.表面化学基团之间的可逆结合（可逆性） * 3.适宜的抗原抗体浓度和比例（比例性） * （二）抗原抗体反应的影响因素 1.电解质 0.85%氯化钠或各种缓冲液 2 .温度 37℃ 56℃ 3 .酸碱度 最适pH值在6-8之间 * 第二节 检测抗原或抗体的体外试验 * 定义：颗粒性抗原(细菌、细胞等或表面包被抗原的颗粒)与相应的抗体在电解质存在的条件下结合，出现肉眼可见的凝集团块现象。 一、凝集反应（agglutination reactions) * 包括： 1.直接凝集反应 (direct agglunitation reatctions) 玻片法：ABO血型鉴定、细菌鉴定 试管法：抗体效价的判定 2.间接凝集反应 (indirect agglunitation reactions) * 直接凝集反应 1:2稀释待测血清 1:4 1:8 1:16 玻片法 试管法 ABO血型鉴定或菌种鉴定 检测抗体的滴度或效价 * 将可溶性Ag/Ab先吸附在某些颗粒载体上，形成致敏颗粒，然后再与相应Ab/Ag进行反应产生凝集，叫做间接凝集反应。 间接凝集反应 * 二、沉淀反应（precipitation reactions） 定义： 可溶性抗原与相应抗体在适当电解质存在条件下结合，出现肉眼可见的沉淀物，称为沉淀反应。 * 可在液体/半固体琼脂中进行。 包括： 1.单向琼脂扩散（可溶性抗原定量） 2.双向琼脂扩散 3.免疫电泳 * Ag Ag Ag Ag Ab in gel 单向琼脂扩散 用于确定抗原浓度 * Ag1 Ab Ag2 Ag3 Ag4 双向免疫扩散 鉴定多种抗原是完全相同、部分相同或完全不同，抗原纯度鉴定 * 免疫电泳 存在于不同区域的抗原与抗体结合，在比例适宜处形成沉淀弧。 沉淀弧的数量、位置和形状与标准品相对比，可分析样品的成分及其性质。 * 将抗原抗体反应与标记技术相结合，将已知的抗体或抗原标记上失踪物质，通过检测标记物，间接测定抗原-抗体复合物的一类试验方法。 三、免疫标记技术(immunolabeling techniques) * 常用的标记物： 酶 荧光素 放射性元素 胶体金 化学发光物质等 * ①免疫酶测定法 双抗体夹心法ELISA 间接ELISA a） b） BAS—ELISA 利用生物素和抗生物素蛋白为桥梁 * d）免疫组化技术 定位、定性、定量检测 * ②免疫荧光技术 * * ③放射免疫测定 用放射性核素标记抗原或抗体进行的免疫测定。将同位素的敏感性与抗原抗体结合的特异性结合起来，具有重复性好、准确性高等优点，广泛应用于激素、药物等微量物质的检测。常用的有131I、125I。 ④化学发光免疫技术 将化学发光分析和免疫反应相结合而建立的一种新的免疫分析技术。最常用的发光物质是鲁米诺。 灵敏度高、简便、可实现自动化分析。 * ⑤免疫胶体金技术 用胶体金颗粒标记Ab/Ag，以检测未知Ag/Ab的方法。 氯金酸在还原剂作用下，可聚合成特定大小的金颗粒，形成带负电的疏水胶溶液，因静电作用而呈稳定的胶体状态。 该技术可应用