人脐带沃顿胶间充质干细胞体外分离条件的优化及传代效应-天津医药.PDFVIP

142 TianjinMedJ,February2015,Vol.43No.2 人脐带沃顿胶间充质干细胞体外分离条件的优化及 传代效应的流式细胞学检测 1 1,2 1,2△ 洪敬欣 ，李茜 ，韩俊领 摘要：目的 观察不同胶原酶消化方法对人脐带沃顿胶间充质干细胞（mesenchymalstemcell，MSC）分离和培养 结果的影响，并鉴定其分化潜能；探讨传代效应对其免疫表型的影响。方法 将制备好的脐带标本分别加入 Ⅰ型、 Ⅱ型及Ⅳ型胶原酶，持续消化4～18h，筛网过滤，离心收集细胞，用DMEM/F12培养基重悬细胞，调整细胞密度4.8× 3 4 2 10 ～1×10/cm ，接种培养，比较不同消化法分离人脐带沃顿胶MSC的效果。Vonkossa钙结节染色、四环素荧光标记 鉴定人脐带沃顿胶MSC 向成骨方向分化的能力，RT-PCR鉴定其向心肌细胞分化的能力。应用流式细胞仪检测连 续传代后MSC 的免疫表型变化。结果 Ⅰ型胶原酶消化法能够从人脐带沃顿胶获取了数量较多、活力较高的 MSC，而且细胞出现伸展的时间及原代培养时间均短于Ⅱ型胶原酶及Ⅳ型胶原酶消化法。表面标记分析显示：随着 传代次数的增加，阳性标记CD29、CD44、CD73、CD90、CD105的表达百分率没有变化，而阴性标记CD31、CD34和 HLA-DR的表达率增加明显。体外诱导实验表明：来源于人脐带沃顿胶的MSC具有体外成骨和成心肌样细胞分化 的能力。结论 Ⅰ型胶原酶消化法简单易行，对细胞损伤小，能稳定、高效地从人脐带沃顿胶中分离出MSC。 关键词：脐带；间质干细胞；胶原酶类；传代效应；沃顿胶 中图分类号：R394.2 文献标志码:A DOI:10.11958/j.issn.0253-9896.2015.02.008 Optimizationthemethodologyofisolatinghumanubilicalcordmesenchymalstromalcellsfrom Whartonsjellyandexaminationoftheirpassageeffectonimmunephenotypeusing flowcytometry 1 1,2 1,2△ HONGJingxin,LIQian ,HANJunling 1UnionStemCellGeneEngineeringCo.,Ltd.,TianjinCordBloodBank,Tianjin300384,China;2InstituteofHematology, BloodDiseaseHospital,PekingUnionMedicalCollegeandChineseAcademyofMedicalSciences △CorrespondingAuthor E-mail:hanjl1@126.com Abstract: Objective Toobservetheeffectsofdifferentcollagenasedigestions onisolatinghumanumbilicalcord mesenchymalstromalcells(MSC)fromWharton’sjelly,toexamtheirdifferentiationabilityandtoinvestigatetheirpassage