HA结合肽的筛选与序列分析.PDFVIP

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2018-08-18 发布于天津
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HA结合肽的筛选与序列分析

China B iotechnology, 2005, 25( 10): 25~ 28 HA* ** 茆灿泉刘畅马春燕徐柳佟鑫郭泰林李学如吴坚 ( 610031) 利用噬菌体随机十二肽库对羟基磷灰石进行结合肽筛选, 经 4轮生物淘洗和选择噬菌体增和DNA 测序, 获得一组多肽序列, 其中含有较高比例的脯氨酸亮氨酸谷氨酸谷氨酰胺以及疏水氨基酸经 Blast分析C U STA W 多重序列比对推得羟基磷灰石结合肽可能的结合基序为V PPP(X) P /XPP(X) P, (X为任意氨基酸) 认为脯氨酸等氨基酸的高比例特性以 6 4~ 6 及结合基序特征可以很好地解释羟基磷灰石的生物可利用性和安全性在生物体中未发现结合肽有价值的相似 DNA 编码序列和多肽蛋白质序列噬菌体单克隆反筛功能测定进一步确定了相关序列对羟基磷灰石的结合能力羟基磷灰石噬菌体随机肽库结合肽淘洗基序 13 [ Hydroxyapatite, HA, Ca ( PO ) 1. 1. 2 噬菌体随机十二肽库 : 1. 5 10 pfu/m,l 10 4 6 q + (OH) ], E. coli ER2738 (F!lacI ( lacZ )M 15 proA 2 , + R B /zzf : : Tn10( Tet )fhuA 2 supE thi ( lacproAB ) [ 1~ 2] - - - , ( hsdMS crB) 5( rk k )M crBC ) , New England [ 3~ 4] HA( B iolabs( Ca.t 8110) ), 1. 2 HA 1. 2. 1 噬菌体随机肽库的HA 结肽筛选 1985 Sm ith HA 1. 5m lEppendorf, , 10 , 1. 0 10 pfu, 50r/m in 30m in, 1000r/m in 1m in , , [ 5~ 6] NaHPO ( 0. 02mol/l, pH 7. 2, 1m l) 5 2 4 HA, NaH PO ( 0. 02m ol/ ,l pH 3. 5, 300l) HA