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蛋白质探针技术 一. 蛋白质的免疫印迹 二. Far Western印迹技术 三. 蛋白质芯片 一 . 蛋白质的免疫印迹（western) 场所：硝酸纤维素膜 待检分子：蛋白 探针： 抗体 一抗：针对待测分子的抗体 二抗：针对一抗的抗体，标记有放射性同位素或生物素 杂交的方式：经电泳分离不同的蛋白，转印到硝酸纤维素膜上，用特定的抗体与蛋白杂交，检测特定的蛋白。 操作过程 二. Far Western印迹技术　用GST(谷胱甘肽s－转移酶)融合蛋白鉴定蛋白质——蛋白质相互作用 Far Western印迹分析 本例中，探针蛋白是一种ＧＳＴ融合蛋白，包含ＧＳＴ、紧跟ＧＳＴ的蛋白酶切割位点和一种与目的蛋白具有相同翻译框架的已知激酶靶部位。 Far Western印迹技术优缺点 该技术能用新蛋白大规模筛选文库以鉴定新的相互作用，以及确定介导这些相互作用的蛋白质上的特异区域。而且，在目的蛋白还没有可用的抗体之前或当蛋白质抗体干扰蛋白质之间相互作用的时候，就可以使用该方法。 ＧＳＴ融合蛋白可用于高度定量及复杂的分析中。值得注意的是，该方法只可用于确定体外相互作用，还应当在体内用单独的方法，如免疫共沉淀加以证实。该技术的灵活性使其被应用于广泛的生物学问题。 三 蛋白质芯片(proteinchip) 利用抗体与抗原特异性结合即免疫反应的原理，将蛋白质分子（抗原或抗体）结合到固相支持物上，形成蛋白质微阵列，即蛋白质芯片。 蛋白质芯片技术在医学中的应用 特异性抗原抗体的检测 生化反应的检测 疾病诊断 对疾病分子机制的研究 药物筛选及新药的研制开发 Thank You * * (1)蛋白的制备 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分离不同的蛋白质 蛋白印迹 (3)封闭 +阳极 -阴极 多孔垫片 滤纸 凝胶 载体 用5％脱脂奶粉或3％BSA 室温2h或4oC过夜 （2）转膜 (4)杂交（一抗与特定蛋白结合） 漂洗去除多余的一抗 二抗与一抗结合 漂洗去多余的二抗 (5)结果检测 Far Western印迹技术 用32P标记的体外表达蛋白作探针,直接检测 与该蛋白发生相互作用的蛋白或表达该蛋白 的cDNA。 纯化的重组ＧＳＴ融合蛋白在其融合部位的激酶共有位点被放射标记 标记的蛋白质可用于探测膜，而膜可通过ＳＤＳ－ＰＡＧＥ，或将表达文库铺板而产生。 蛋白质芯片技术 基本原理是将各种蛋白质有序地固定于滴定板、滤膜和载玻片等各种载体上成为检测用的芯片，然后，用标记了特定荧光抗菌素的蛋白质或其他成分与芯片作用; 漂洗将未能与芯片上的蛋白质互补结合的成分洗去，再利用荧光扫描仪或激光共聚焦扫描技术，测定芯片上各点的荧光强度，通过荧光强度分析蛋白质与蛋白质之间相互作用的关系，并最终达到测定各种蛋白质功能的目的。