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应用抑制消减杂交技术筛选大肠癌新相关基因.PDF
现代消化及介入诊疗 2006 年 第 11 卷 第3 期 ModernDigestionIntervention2006,Vol.11, No.3 -133 - 窑论 著窑 应用抑制消减杂交技术筛选大肠癌新相关 基因 1 1 2 2 叶方鹏 李荣洲 肖 冰 张万岱 揖摘要铱目的 利用抑制消减杂交技术渊SuppressioSubtractivnHybridizatione,SS冤H构建人大肠癌差 异表达 cDNA文库袁分离并克隆出大肠癌发病的相关新基因遥方法 运用抑制消减杂交技术分离大肠癌 组织及癌旁正常黏膜差异表达基因的 cDNA片断袁将其与 T载体连接构建文库袁从库中随机挑取 200个 白色菌落袁使用 PCR方法鉴定阳性克隆并对其中 50个克隆进行测序袁将测序结果登录 GenBank进行同 源性对比分析袁并对部分有意义的差异表达片断进行 VirtualNorthernBlot分析遥结果 成功构建人源性 大肠癌消减 cDNA文库袁通过筛选获得 20个差异表达的基因袁其中有 2个片断未检测到同源性序列袁根 据杂交结果考虑可能是在大肠肿瘤中差异表达的新基因遥结论 运用 SSH技术成功构建了人大肠癌的 差异表达的 cDNA消减杂交文库袁并筛选出 2个在大肠肿瘤中差异表达的新基因遥 揖关键词铱大肠癌曰抑制消减杂交曰cDNA文库 Screeninofnegenewg relates tothdcolorectae carcinomlwitsuppressioha subtractivnhybridizatione 1 1 2 YEFang-peng,LIRong-zhou,XIABingO ,etal1.DepartmenofGastroenterologyt Peopl忆sHospital,e , Ruian325200,Zhejiang;2DepartmentofGastroenterology,NanfangHospital,SouthernMedicalUniversity, Guangzhou510515,China 揖Abstract铱 AimsToconstructcDNAlibrariesofcolorectalcarcinoma,andscreenandclonethenew genesrelatedtothecolorectalcarcinoma.MethodscDNAfragmentsofdifferentlyexpressedgenesincol原 orectalcarcinomaandnormalintestinaltissueswereisolatedwithsuppressionsubtractivehybridization(SSH). ThenthesecDNAfragmentsweredirectlyinsertedintoTvectortosetupthesubtractivelibrary.Twohundreds ofpositivbactericlonee wera srandomle pickeyanidentifiedd bycolonPCdyRmethodThe.5n0differently expressedgenesweresequencedandanalyzedwithBLASTprograminGenBankwiredNCBIwebsite.Some geneswereidentifiedbyVirtualNorthernBlot.ResultscDNAlibraryofcolorectalcarcinomaandnormal intestinetissuewassuccessfullyconstructed,and20differentlyexpressedgeneswereobtainedafterfiltration. Twonewgenesdidnotmatchtheidenticalsequence,andtheyshouldbenewgenesrelatedtothecolorectal cancer.ConclusionscDNAlibraryofcolorectalcarcinomaandnormalintestinetissuewasconstructedby
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