第五章__植物离体快速繁殖.pptVIP

植物离体微繁的特点 1.繁殖系数高，繁殖周期短，繁殖速度快：它的高速度是以下三种因素构成的：①有较高的增殖倍数;②较短的增殖周期；③周年生产。 2.应用广泛，是推广良种的重要手段：占用空间小，生产效率高，省时、省工、节约土地。 3.繁殖材料用量少，不受季节限制，可实现工厂化生产； 4.能获得无毒苗木无性系 5.木本植物应用潜力大：繁殖各种珍稀、濒危、名贵、突变物种。 外植体的选择 第四，取材季节合理： ①选取外植体的季节和时间，对培养材料的启动和培养至关重要。 ②一般在生长季—春夏。 第五，考虑器官的生理状态和发育年龄； 第六，选择大小合适的外植体； 外植体过大，不易灭菌，过小，不易成活。一般0.5-1cm；脱毒培养0.2-0.5cm。 外植体的灭菌 无菌的外植体材料是植物组织培养成功的重要前提与可靠保证，而消毒 则是获得无菌外植体的有效方法。取来的外植体需要经过仔细的表面灭菌处 理，外植体灭菌常用消毒剂。 消毒注意事项： 1.正确选择消毒剂种类及浓度、消毒时间，减少组织的死亡. 2. 在用消毒剂对材料表面消毒后，必须用无菌水漂洗3次以上以除去残留杀 菌剂，但用酒精消毒时，则不必漂洗。 3. 与消毒剂接触过的切面在转移至无菌基质前需切除，因为消毒剂会阻碍植物细胞对基质中营养物质的吸收。 4. 在外植体污染严重时，应用流水漂洗1h以上或先种子培养得到无菌种苗， 然后用其各个部分建立组织培养。 5.Hgcl2效果最好，但较难从外植体去除， 对人的伤害也最大，用后要用水冲洗至少5次。 外植体的接种和培养 外植体的接种—无菌操作 外植体表面灭菌—切取分离—无菌培养基 外植体的培养 光照、温度、湿度、培养基pH、气体调节 注意 无菌培养体系的建立需注意下面两个问题： 1.采样和表面灭菌；　　 2.首次接种污染率的估算与对策： 首次接种，小容器，多数量，尽 量分散，互相隔离，效果最好。 茎段培养过程 将经过表面消毒的茎段在无菌条件下，切成几厘米长带芽的节段， 接种在固体培养基上。经过培养后，茎段可直接发生不定芽，或先诱导 形成愈伤组织，再脱分化形成再生苗。把再生苗进行切割，转接到生根 培养基上培养，便可得到完整的小植株。 4）原球茎的发育 大部分兰花的培养属于这一类型。 原球茎特点: 缩短的、呈珠粒状的、由胚性细胞组成的、类似嫩茎 的器官。 原球茎是一种类胚组织，培养兰花的茎尖或腋芽可直接产生原球 茎，继而分化成植株，也可继代增殖为原球茎。 特点：受材料的局限性较大。 试管苗的移栽 试管苗的移栽要注意以下几点; 首先，要保持小苗的水分供需平衡。 第二，要选择恰当的种植介质，最要紧的是疏松透气，适宜的保水性， 容易灭菌处理，不利于杂菌滋生。常用的有粗粒状蛭石、珍珠岩、粗沙、炉 灰渣、谷壳(或谷壳灰)、锯木屑等，或者将它们以一定的比例混合使用。 第三，要防止菌类滋生。试管苗原来的环境是无菌的，种植出来以后难 以保持完全无菌，但应尽量不使菌类大量滋生，以利于试管苗成活。 第四，要注意一定的光、温条件。一般强度较高的慢射光较好。 第五，再生植株的鉴定：是指用细胞学或形态学等方法检查再生植株是 否有遗传变异。 试管苗的移栽基质 5.3.1.1 植物材料（外植体）的影响 外植体的影响包括：外植体的基因型、外植体的类型及其生理状态、外植体的大小、取材植株的年龄及生理状态等。 在植物组织培养中，基因型的影响是非常突出的问题， 可能原因：基因对激素需求有一定的控制作用。 5.3.1.2 继代培养 (1) 形态发生能力的保持或丧失； (2) 培养中发生的变异 (3) 继代培养时间长短 (4) 季 节 (1) 形态发生能力的保持或丧失； ①在大多数以顶芽或腋芽增殖方式繁殖的植物中，在培养许多代之后， 仍然保持着旺盛的增殖能力，对于这种类型，似乎不大会出现形态发生 能力削弱或丧失的问题，它们完全类似于常规的无性繁殖，只不过微型 化了而已； ②采用细胞培养或愈伤组织培养的研究，需要关心着形态发生能力是否 能持久。形态发生能力减弱或丧失大多由三个因素造成： 形态发生能力减弱或丧失大多由三个因素造成： a. 愈伤组织中含有从外植体启动分裂时就包括进来的成器官中心(分生 组织)，当重复继代时会逐渐减少至丧失．当它们不存在时，其它的愈 伤组织难以再诱导形成成器官中心，这些愈伤组织不能形成维管束， 而始终保持着无组织结构的细