反向胶束萃取技术.pptVIP

反相胶束萃取技术Reversed Micelle Extraction;一、反相胶束萃取概况;二、反相胶束萃取的概念;反胶束溶液是透明的，热力学稳定的系统。它由表面活性剂，有机溶剂和水组成。 表面活性剂是由亲水憎油 的极性基团和亲油憎水的 非极性基团组成的两性分 子。;;临界胶束浓度（Critical micelle concentration) 临界胶束浓度：是胶束形成时所需的表面活性剂的最低浓度，用CMC来表示。与表面活性剂化学结构、溶剂、温度、压力等因素有关。CMC值可通过测定表面活性剂各种物理性质的突变(如表面张力，渗透压、浊度、当量电导等)来确定。 ;;三、反相胶束萃取的基本原理;1.蛋白质在微胶束中的结合方式 （1） “水壳”模型 ;(2)“吸附”模型 “吸附”模型认为生物大分子虽然溶解于由表面活性剂极性部分围成的中心中，但在中心部分生物大分子是以被吸附的状态附着于胶团的极性壁上 ;四、反相胶束萃取的方法; 注入法 通过将含有生物大分子的水溶液注入到含有表面活性剂的有机相中，从而实现萃取过程。 溶解法 对于固体粉末中的生物大分子，或不溶于水的生物大分子，可采用溶解法进行。先制备好含水(w0 =3～30左右)的反相微胶束的有机溶液，然后把含生物大分子的固体粉末加入此种反相微胶团的有机溶液中，同时搅拌，生物大分子慢慢即可进入到反相微胶团内的水池中心而实现萃取过程。 ;五、简单且敏感的AOT/异辛烷反相胶束方法测定脂肪氧合酶;;;;;;3.结果与讨论 3.1AOT对反相胶束测定脂肪氧合酶活性的影响 一个主要的局限就是AOT作为表面活性剂具有强的紫外吸收作用。 为了克服这一干扰，清楚AOT是必须得。 ;去除反相胶束中的AOT是通过在溶液中添加乙醇水溶液实现的。 ;AOT的去除效率依赖于AOT的浓度 ;3.2有机溶剂的选择 环己烷、正庚烷、正己烷、异辛烷和十六烷这五种有机溶剂经常用于反相胶束中测定脂肪酶的活性。 在测定脂肪氧合酶活性的反相胶束溶剂中异辛烷是最有效的。 ;;;;3.3水含量对AOT/异辛烷反相胶束的影响 反相胶束中水含量对生物催化活性的大小是一个关键的因素，并且它甚至会影响内部酶的稳定性。 总之，在含水量为10的反相胶束中，脂肪氧合酶活性最大，是最适环境。 ;3.4在反相胶束系统中脂肪氧合酶测定的验证 根据改变酶浓度监测初始速度评估脂肪氧合酶测定。 浓度从下至上分别为18,36,54和72μg/ml，通过等式计算出初始速度分别为0.046,0.114,0.197和0.268μmol/min。 ;