动物细胞融合和单克隆抗体(授课用).pptVIP

（一）动物细胞融合 1、动物融合的过程 请同学们阅读课本P52动物融合 思考题 1、植物体细胞杂交时首先应用什么方法去掉细胞壁？ 2、动物细胞融合的概念 动物细胞融合也称细胞杂交，是指两个或多个动物细胞形成一个细胞的过程 思考题 ★制备单克隆抗体时，为什么要选用B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞？ * “番茄—马铃薯”理想图 通过长期的实验，科学家们采用体细胞杂交技术获得了“番茄—马铃薯”植株。 杂种植株 筛选融合AB 的原生质体 再生出细胞壁 脱分化 愈伤组织 再分化 植物细胞的融合 植物组织培养 植物细胞A 原生质体B 原生质体A 杂种细胞AB 去 壁 去 壁 人 工 诱 导 方法？ 促进融合的方法？ 融合完成的 标志 植物细胞B 植物体细胞杂交技术过程 原理？ 原理？ 成果和未解决的问题 成果：克服不同生物远缘杂交的障碍，出 现自然界没有的新品种。 未解决的问题：未能让杂种植物按照人们 的需要表现出亲代的优良。 不同DNA的两个细胞 灭活病毒诱导细胞融合 融合后的细胞进行有丝分裂 1、动物细胞融合过程 膜融合 质融合 核融合 注意：动物细胞的融合也需要把多个两种细胞放在一起，让它们随机融合后，再从中筛选杂交细胞 酶解法，如纤维素酶或果胶酶 2、动物细胞融合时需要进行去壁处理吗？为什么？ 无需，因为动物细胞无细胞壁 3、植物体细胞杂交诱导原生质体融合常用的方法有哪些？ 离心、电激等物理方法；PEG等化学方法 4、动物细胞融合能利用上述两类方法吗？还有其他方法吗？ 能 还可以利用灭活的病毒进行诱导 5、植物体细胞杂交应先进行原生质体的融合再进行组织培养形成完整的杂种个体，动物细胞融合后能形成杂种动物个体吗？ 不能 6、你能归纳出什么叫做动物细胞融合吗？ ？ 主要用于制备 单克隆抗体 获得杂种植株 用途 物理、化学方法 （同左） 灭活的病毒 物理（离心、振动、电刺激） 化学（聚乙二醇） 诱导方法 使细胞分散后诱 导细胞融合 去除细胞壁后诱 导原生质体融合 细胞融合的方法 细胞膜的流动性 细胞膜的流动性、 植物细胞全能性 原理 动物细胞融合 植物体细胞杂交 比较项目 3、植物、动物细胞融合的比较 4、意义：突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交（种间、属间、科间、动植物之间）成为可能。 5、应用：成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育等的重要手段 特别是利用杂交瘤技术制造单克隆抗体 5.如何得到抗体？ 提问 ？ 浆细胞 主要分布在血浆和组织液中 从动物血清中分离所需抗体； 1.抗体由何种细胞产生？ 4.抗体主要分布在哪里？ 2.一个Ｂ淋巴细胞(浆细胞)能分泌多种抗体吗？ 每一个浆细胞只分泌一种特异性抗体 ３.动物在免疫反应过程中，体内产生的特异性抗体种类可多达百万种以上，说明浆细胞种类？ 提问 ？ 6.传统的抗体生产办法及缺陷是什么？ 办法：向动物体内反复注射某种抗原，使动物产生抗体，然后从动物血清中分离所需的抗体。 抗原 动物体 刺激 浆细胞 抗体 抗体不纯 特异性差、纯度低； 产量低、反应不够灵敏 抗原不纯 每个Ｂ淋巴细胞只能分泌一种抗体，由一个Ｂ淋巴细胞增殖产生的细胞群分泌的抗体化学成份是单一的。 体外培养B淋巴细胞（浆细胞）能无限增殖吗? 怎样解决这个问题？ 要想获得大量的单一抗体，必须克隆单一的B淋巴细胞，形成细胞群 不能 提问 设计方案： 一个B淋巴细胞－－只分泌一种特异性抗体 小鼠骨髓瘤细胞－－能无限增殖 杂种细胞 二、单克隆抗体 2.制备过程： 诱导其融合的方法有哪些？ 融合后培养液中有几种细胞 怎样筛选出杂交瘤细胞，杂交瘤细胞有何优点 注射抗原的目的是什么 为何要进行克隆化培养和专一抗体检测，多次筛选 大量增殖杂交瘤细胞获得单抗的方法 3.单克隆抗体的应用： ①在基础理论研究中具有重要意义 ②在疾病诊断、治疗和预防方面，具有 特异性高、灵敏度高等优越性。 ③生物导弹 二、单克隆抗体 1、原理：杂交瘤细胞具有两个亲本的特性，即能迅速大量增殖，又能足够数量的单一抗体。 2、过程 B淋巴细胞 骨髓瘤细胞 诱导融合 B-B细胞 B-瘤细胞 瘤-瘤细胞 选择培养 杂交瘤细胞（ B-瘤细胞） 克隆化培养 抗体检测 杂交瘤细胞 体外培养 小鼠腹腔内增殖 单克隆抗体 总结：单克隆抗体制备 3.单克隆抗体的应用： 单克隆抗体的优点：特异性强、灵敏度高、产量大 ①作为诊断试剂：准确识别各种抗原物质，并与特异性结合 优点：准确、高效、简易、快速 ②用于 运载药物：制成“生物导弹” 治疗疾病：主要用于癌症治疗 一种诱导细胞融合的新方