绿僵菌分解昆虫外壳蛋白酶map-21的纯化与特性中国科技论文在线.pdfVIP

____________________________________________________________________ 40 卷 　3 期 微 生 物 学 报 Vol. 40 　No. 3 2000 年 6 月 Acta Microbiologica Sinica J une 　2000 绿僵菌分解昆虫外壳蛋白酶 MAP - 21 的纯化与特性 裴 　炎 　冀志霞 　杨星勇 　卢晓风 　夏玉先 ( 西南农业大学生物技术研究中心　重庆　400716) 摘 　要 : 以蝉蜕为底物诱导绿僵菌产生分解昆虫外壳蛋白酶。发酵液经超滤、Ultrogel AcA 54 凝胶层析、制备 IEF 电泳,纯化了一种蛋白酶 MAP - 21 ,SDS - PA GE 电泳后经银染色呈 单带。该酶的 Mr 为 27kD 左右 ,p I 为 7 6 。它的特异识别氨基酸为Arg ,其活性可被 PMSF 和 TLCK 抑制 ,表明其活性中心有 Ser 和 His 残基。它还可被胰蛋白酶的典型抑制剂 Leu peptin 、Antipain 及 STI 等所抑制 ,而胰凝乳蛋白酶抑制剂 TPCK 和胰凝乳弹性蛋白酶抑制剂 TEI 对其活性无影响。专一底物和抑制剂特性试验结果表明 MAP - 21 是类胰蛋白酶。此 外 ,该酶还可被 EDTA 所抑制 ,表明金属离子为其活性所必需。另外还研究了 MAP - 21 的 最适作用温度和p H , 以及温度耐受性等特性。 关键词 : 绿僵菌 , 蛋白酶 , 纯化 , 特性 中图分类号:Q936 　　文献标识码 :A 　　文章编号 :0001 - 6209 (2000) 03 - 0306 - 11 利用昆虫病原真菌防治害虫已引起了国内外的广泛关注。研究昆虫病原真菌的侵染 机制 ,对于筛选高效杀虫菌株以及认识昆虫 - 病原微生物相互关系均有重要意义[1～3 ] 。 Charnley 和 Leger [4～11 ]等对昆虫病原真菌侵染过程中产生的分解寄主外壳的水解酶进行 了大量研究 ,发现一些蛋白酶在病原真菌的侵染过程中起重要作用 ,并与菌株感染寄主的 毒力密切相关。但是 , 目前已纯化的昆虫病原真菌降解寄主外壳蛋白酶还不多。而且,在 ( ) 已报道的此类蛋白酶中,有关凝乳弹性蛋白酶 Chymoelastase ,Pr1 纯化与功能研究相对 ( ) 较多 ,而对类胰蛋白酶 Trypsinlike protease ,Pr2 报道较少。前人的结果还表明 ,虽然所 有病原真菌的降解寄主外壳过程中都有蛋白酶产生 , 但这些酶类存在种间和种内差 异[10 ] 。我国昆虫病原真菌种类繁多、资源丰富 ,有必要对它们产生的此类蛋白酶加以研 究 ,这对了解昆虫 - 病原真菌相互关系、寻找提高杀虫微生物效果新途径 ,均有重要意义。 1 　材料和方法 1 . 1 　菌种 ( ) 金龟子绿僵菌 Metarhizium anisopliae 由本实验室分离保存。 1 . 2 　试剂 ( ) ( ) ( ) 底物 Suc Ala 2ProPheNA ,SucPheNA ,Suc Ala 2ProLeuNA ,Suc Ala 2 - Val ( ) ( )