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第三章第三节 2001年2月2日,杭州西湖区西澳路某公司附近发生一起杀人分尸案。经现场勘察,发现了2块非常细小的尸块,此外并未留下任何痕迹。这2块尸块到底是不是同一人的,被害人是男性还是女性?技术人员从尸块中提取出一些DNA片段,送到刑侦支队利用PCR技术获得了大量的DNA系列。进行性别鉴定和同一认定。结果发现这2块尸块属于同一体,均是女性尸块。这一鉴定为凶案的告破开启了大门。8天后,凶犯杨某被抓获归案。 从案例可知PCR技术起到了什么作用? 一、对DNA复制方式的演绎推理 提出问题:_______________ 提出假设:_______________ 演绎推理: 验证推理: 得出结论: _______________ 1:如果是半保留复制,亲代的DNA分子复制后得到的第1代和第2代的组成是怎么样的?用图解表示出来。 2:如何识别DNA中哪一条是母链, 哪一条是子链? 3:用哪种同位素进行标记,为什么? 4:如果原DNA是15N的, 原料是14N的, 那么请推演复制后的第1代与第2代中N的情况如何? 5: 复制后,子一代的每个DNA全为15N/14N-DNA;第2代中有一半是15N/14N-DNA, 另一半为14N/14N-DNA。但我们是看不出DNA分子的,产生的DNA分子通常是混杂在一起的。有什么技术或方法可以证明上述结论是正确的? 6:如果对每一代的DNA进行离心分离, 实验的结果会是怎样的呢? DNA半保留复制的实验证据 自学思考以下问题,然后与小组同学交流 1、大肠杆菌首先放在什么培养基中培养?然后转移到什么培养基中培养的? 2、如果是半保留复制的,离心后应该出现几条带? 3、三条带离心后在试管中的分布如何? 二、DNA分子复制过程初探 【材料二】步骤1:1956年美国生物化学家康贝格在试管中,将大肠杆菌中提取出的DNA聚合酶加人到具有4种丰富的脱氧核苷酸的人工合成体系中。 结果:在试管中4种脱氧核苷酸不能合成DNA分子。 步骤2:康贝格在上述试管中加人了少量DNA分子和ATP, 培养在适宜温度条件下, 一段时间后, 测定其中DNA的含量。 结果:试管中的的DNA含量增加。 问题:实验中加入的DNA聚合酶、4种脱氧核苷酸,少量DNA以及ATP分别起什么作用? 根据实验可知, 复制需要哪些必需的条件? 问题7:生化分析得知,间期细胞中脱氧核昔酸含量开始时很低,不久急剧增加,以后又逐渐降低到初始水平。随着脱氧核苷酸含量的动态变化,DNA聚合酶的活性显著增高。这说明什么问题? 问题8:将变形虫放在有标记过的脱氧核苷酸培养液中,一段时间后,在细胞核中首先发现有标记的DNA分子。这说明什么问题? 拓展题 1、女性子宫肌瘤细胞中最长的DNA分子达36mm,复制速度约为4um/min,但复制过程仅需40min左右即完成。试分析其可能的原因。 2、研究表明,DNA的复制总能准确无误地进行, 其复制过程中出错的概率仅为1/20000。你认为DNA能够准确复制最关键的因素是什么?如果DNA复制发生差错,有可能会带来什么影响或后果? * DNA的复制 重带 中带 轻带 中带 中带 (中间) 15N/ 14N-DNA 重带 (下部) 15N/ 15N-DNA 轻带 (上部) 14N/ 14N-DNA 15N/ 14N-DNA 中带 (中间) 亲代DNA 第一代 DNA 第二代DNA 结论:DNA分子是以半保留的方式复制的。 特点 产物 酶 能量 原料 模板去向 模板 场所 时间 阅读教材p54页“DNA分子复制的过程”,填写下列表格: 三、DNA分子的复制 解旋酶催化 解旋: 模板 (在DNA聚合酶的催化下,利用游离的脱氧核苷酸进行碱基配对) 复制: 以母链为模板进行碱基配对 母链(旧链) 子链(新链) 复制后的DNA: 同时进行 组成 复制过程 * * *
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