长沙人间布鲁菌分离株omp25基因扩增和系统进化分析-中国热带医学.pdfVIP

中国热带医学 2017年第17卷第8期 ChinaTropicalMedicine，August 2017，Vol.17，No.8 ·761 · ·论 著· 长沙人间布鲁菌分离株omp25基因扩增和系统进化分析 苏良，裴瑞青，杨柳青，欧新华，申晓君，孙边成* 长沙市疾病预防控制中心，湖南 长沙 410004 摘要：目的 了解长沙地区人间布鲁菌omp25基因的序列特征并阐明其系统进化关系，为布鲁菌病防控以及 omp25基因克隆与表达研究提供参考。方法 根据GenBank公布的羊种布鲁菌16M的omp25基因序列设计1对PCR引 物，采用PCR法从长沙地区布鲁菌分离株基因组中扩增omp25基因，产物用凝胶电泳进行分析后进行双向核苷酸序列 测定，测序结果用DNAstar7.1进行分析，将测序结果提交GenBank，并利用Mega7软件构建布鲁菌长沙分离株系统进 化树。结果 41株布鲁菌成功扩增出omp25基因片段，片段长度约640bp，通过测序后Blast同源性分析，证实41株菌 株均为羊种布鲁菌，长沙分离株与10株羊种布鲁菌序列100%相同，进化树显示长沙分离的布鲁菌和国内外羊种布鲁 菌位于同一进化分支上，同广西的LA1105参考株亲缘关系最近。结论 长沙地区人间布鲁菌分离株omp25基因序列 与参考菌株序列同源性高，且与羊种布鲁菌在同一分支，表明omp25基因序列是一个保守序列。该研究结果可为布鲁 菌的分子生物学鉴定和诊断试剂的研制提供参考。 关键词：布鲁菌病；布鲁菌；omp25基因；进化分析 1009-9727(2017)08-761-05 DOI:10.13604/ki.46-1064/r.2017.08.05 中图分类号：R378.5 文献标识码：A 文章编号： omp25geneamplificationandphylogeneticanalysisofclinical Brucellaisolated fromChangsha SULiang,PEIRuiqing,YANGLiuqing,OUXinhua,SUNxiaojun,SUNBiancheng ChangshaCenterforDiseaseControlandPrevention,Changsha,Hunan410004,China Correspondingauthor:SUNBiancheng,E-mail:cscdchiv@126.com Abstract:Objective Tounderstandthecharacteristicsoftheomp25genesequencefromclinicalBrucella isolatedfrom ChangshaCityandelucidatetheirphylogeneticrelationshipinordertoprovidethereferencesforpreventionandcontrolof brucellosisand omp25 genecloningandexpressionstudies. Methods Apairofprimersforthegenesequenceof omp25 of Brucella wasdesignedafterreferringtoGenBankreleased Brucella melitensisstrain 16M.Polymerasechainreaction(PCR) wasusedtoampli