芽孢杆菌植酸酶phyycd基因在大肠杆菌中的异-应用与环境生物学报.pdfVIP

2014-04-25 DOI: 10.3724/SP.J.1145.2014.00295 / Chin J Appl Environ Biol 2014 20 ( 2 ) : 295-299 应用与环境生物学报 ， 芽孢杆菌植酸酶phy(ycD)基因在大肠杆菌中的 * 异源表达与纯化 1 1 1 2 1 1** 王 茜 卢文亮 姚明泽 胡风云 付月君 梁爱华 1山西大学生物技术研究所化学生物学与分子工程教育部重点实验室 太原 030006 2 山西省人民医院神经内科 太原 030012 摘 要 为研究中性植酸酶的性质，将芽孢杆菌来源植酸酶基因phy(ycD) 构建到大肠杆菌表达载体pET-28a(+)上，进 行诱导表达，利用Ni-NAT和Superdex-75纯化后，对重组植酸酶r-phy(ycD) 的性质进行分析. 结果显示，该酶是 Ca2+依赖 性酶，Ca2+最适浓度为 1 mmol/L，酶比活为4.7 U/mg ，酶促反应的最适pH为6.5，在中性条件下稳定，最适反应温度为 45 ℃，K 值和 V 值分别为0.213 mmol/L和5.55 U/mg. Zn2+ 、Ni2+ 、Ba2+ 和Ag2+对酶促反应均有显著抑制作用. 本研究表 m max 明，Ca2+对该类酶的活性和热稳定性起着关键性作用，因此在表达和纯化过程中需要在培养基和纯化所需的各类缓 冲液中添加Ca2+. 图3 表 1 参22 关键词 中性植酸酶；基因表达；纯化；酶学性质 CLC Q936 : Q786 Heterologous expression and purification of the phytase phy(ycD) gene from Bacillus subtilis in Escherichia coli * 1 1 1 2 1 1** WANG Xi , LU Wenliang , YAO Mingze , HU Fengyun , FU Yuejun LIANG Aihua 1 Key Laboratory of Chemical Biology and Molecular Engineering of Ministry of Education, Institute of Biotechnology, Shanxi University, Taiyuan 030006, China 2 Department of Neurology, Shanxi Provincial People’s Hospital, Taiyuan 030012, China Abstract Phytase gene phy (ycD) from Bacillus subtilis was cloned into a pET-28a(+) expression vector and expressed in Escherichia coli. The phytase phy(ycD) was purified by Ni-NAT and Superdex-75. This phytase was a Ca2+ dependent enzyme, with optimum enzymatic Ca2+ concentration 1 mmol/L. Specific activity of this phytase was 4.7 U/mg. The phytase