分子生物学常用研究技术.DOC

分子生物学实验指导 第一节、实验室规则及安全防护 一、实验室规则 二、实验室安全防护 第二节、分子生物学常用研究技术 一、核酸分离纯化 二、聚合酶链反应技术 三、分子杂交技术 四、分子克隆技术 五、其它新技术 第三节、常用仪器使用 一、离心机 二、分光光度计 三、PCR仪 第四节、如何撰写实验报告 第五节 核酸分离纯化技术 实验一、基因组DNA的提取制备与检测 实验二、总RNA的提取制备与检测 实验三、质粒DNA的提取制备与检测 第六节 PCR技术 实验四、常规PCR技术 实验五、定量PCR技术 第七节 分子克隆技术 实验六、DNA的限制性酶切与电泳 实验七、凝胶中DNA片断的纯化回收 实验八、DNA连接实验 实验九、感受态细胞的制备 实验十、重组DNA转化与篮白斑筛选 第八节 分子杂交技术 实验十一、Southern 印迹杂交 实验十二、Northern印迹杂交 实验十三、Western印迹 实验十四、核酸原位杂交 第九节 综合性实验 实验十五、蛋白质双向电泳 实验十六、酵母双杂交实验 实验十七、RNA干扰实验 第一节、实验室规则及安全防护 一、实验室规则 1．每个同学都应该自觉遵守课堂纪律，维护课堂秩序，不迟到，不早退，不大声谈笑。 2．实验前认真预习实验内容，熟悉本次实验的目的，基本原理，操作步骤，懂得每一步操作的意义和了解所用仪器的使用方法，否则不能开始实验。 3．实验时要听从指导老师的指导，严格认真地按规程进行实验，并注意与同组同学的配合。未经许可，不得乱动实验装置、仪器以及电器设备等。 4．实验数据和现象应随时记录在专用的实验记录本上。实验结束时，实验记录必须送指导老师审阅后方可离开实验室；实验报告应该当堂完成或在下次实验开始前交给指导老师。 5．保持台面、地面、水槽内及室内整洁。精心爱护各种仪器，要随时保持仪器的清洁。如发生故障，应立即停止使用并报告指导老师。完成实验后应将器材洗净，把器材、药品归放回原处，试管倒置于试管架中并排列整齐。按规定处理好废物，废液，做好清洁卫生。器材、仪器如有损坏须立即报告指导老师并按学校规定进行适当比例赔偿。 6．按需要量取药品及蒸馏水等各种物品，注意节约。 7．公用仪器，药品用后放回原处。多取的药品不得重新倒入原试剂瓶内。公用试剂瓶的瓶塞要随开随盖，不得混淆，更不能互相污染。严禁用口吸或用皮肤接触有毒药品与试剂。 8．需交指导老师保存的样品，药品及其他物品都应加盖，并标注自己的姓名，班级，日期及内容物。 9．废液体可倒入水槽内，同时放水冲走。含强酸，碱及有毒废液应倒入废液缸。废纸屑及其它固体废物和带渣滓的废物倒入废品篓或废品缸中，不能倒入水槽或到处乱扔。书包及实验不需之物品放在规定处。 10．实验室内严禁吸烟！不得将含易燃溶剂的溶液近火。对电炉等火源，严格做到：人在火在，人走火灭。乙醇、丙酮、乙醚等易燃品不能直接加热，并要远离火源操作和放置。实验完毕，应立即拔去电炉插头和关好水龙头，拉下电闸。漏电的设备一律不得使用。离开实验室前应该检查水、电、窗等是否关好。 11．实验室内一切物品，未经教师批准，严禁带出室外。 12．每次实验课由班长或课代表负责安排值日生。值日生的职责是负责当天实验室的卫生、安全和其它服务性工作。 实验室是学校教学的重要科学基地，贮存有贵重的仪器和化学危险药品等。为防止损失和产生事故，必须做好防盗、防火、防水、防毒和安全用电等工作。 （一）防盗 1．加强防卫，经常检查，堵塞漏洞。 2．非工作人员不得进入仪器室，室内无人时随即关好门窗。 3．仪器室内不会客，不住宿，未经领导同意，谢绝参观。 4．发生盗窃案件时，保护好现场，及时向领导、治安部门报告。 （二）防火、防爆 1．严禁在仪器室内生火取暖。 2．易燃、易爆的化学药品要妥善分开保管，应按药品的性能，分别做好贮藏工作，注意安全。 3．做化学实验时要严格按照操作规程进行，谨防失火、爆炸等事故发生。 （三）防水 1．实验室的上、下水道必须保持通畅。 2．冬季做好水管的保暖和放空工作，要防止水管受冻爆裂酿成水患。 （四）防毒 1．实验室必须做好防毒工作，有毒物质应妥善保管和贮藏，实验后的有毒残液要妥善处理。 2．凡易燃、易毒、腐蚀剂等危险性药品要设专柜单独存放。要定期检查，严格管理，做到双人管理、双人收发、双人领取、双人记帐、双人把锁。 3．实验中严格遵守操作规程，制作有毒气体要在通风橱内进行，保持实验室内通风良好。 4．化学实验室备有废液缸，实验室附近有废液处理池，防止有毒物质随意排放。 （五）安全用电 1．实验室电路及用电设施要定期检修，保证安全，决不带病工作。 2．如有电器失火，应立即切断电源，用沙子或灭火器扑灭。在未切断电源前，切忌用水或泡沫灭火机灭火。 3．遇有人身