电化学发光免疫分析法_21644.pptVIP

化学发光免疫分析法 Chemiluminescence Immunoassay 免疫分析 基于抗原和抗体的特异性反应进行检测的一种手段； 免疫标记技术是将一些既易测定又具有高度敏感性的物质标记到特异性抗原或抗体分子上，通过这些标记物的增强放大效应来显示反应系统中抗原或抗体的性质与含量。 免疫学检测历史演进 放射免疫检测（兴起于20世纪70年代，现仍普遍使用于县级以上医院）； 酶联免疫检测（兴起于20世纪80年代，各临床机构普遍使用）； 以化学发光为代表的光生物学标记及免疫检测技术（20世纪90年代开始推广使用，产品步入成长期）三个阶段。 发光分类 光照发光（荧光）:发光剂经短波长入射光照射后进入激发态，当回复至基态时发出较长波长的可见光。 生物发光：反应底物在荧光素酶的催化下利用ATP产能，生成激发态的氧化荧光素，后者在回复到基态时多余的能量以光子形式放出。 化学发光 化学发光Chemiluminescence (CL) 化学发光是指在某些特殊的化学反应中，反应的中间体或产物由于吸收了反应释放的化学能而处于电子激发态，当其回到基态时伴随产生的光辐射现象。 化学发光原理 所谓化学发光 (CL) , 就是化学反应的能量把体系中共存的某种分子从基态激发到激发态从而产生发光的现象。 化学发光的分类 直接化学发光 A + B ? C* + D C* ? C + h? 例: NO + O3 ? NO2* + O2 NO2* ? NO2 + h? 化学发光的分类 间接化学反应发光 A + B — C* + D C* + E — E* + C E* — E + h? 化学发光免疫技术中常用的化学发光剂或发光底物 酶促反应的发光底物 直接化学发光剂 电化学发光剂 1．酶促反应的发光底物 酶促反应的发光底物是指经酶的降解作用而发出光的一类发光底物，目前化学发光酶免疫技术中常用的酶有辣根过氧化物酶（HRP）和碱性磷酸酶（ALP），相应发光底物为： (1) HRP的发光底物 常用的底物为鲁米诺或其衍生物和对-羟基苯乙酸。 ①鲁米诺或其衍生物 鲁米诺的氧化反应在碱性缓冲液中进行，通常以0.1mol/L pH8.6 Tris缓冲液作底物液。 ② HPA在H2O2存在下被HRP氧化成氧化二聚体（荧光 物质），在350nm激发光作用下，发出450nm波长 的荧光，可用荧光光度计测量。 （2）ALP的发光底物 常用的底物为3-（2-螺旋金刚烷-4-甲氧基-4-甲基-4-（3-磷酸氧基）-苯基-1，2-二氧乙烷（AMPPD）和4-甲基伞形酮磷酸盐（4-MUP，荧光底物）。 ①AMPPD　 AMPPD在碱性条件下，被ALP酶解生成相当稳定的AMP-D阴离子，其有2-30min的分解半衰期，发出波长为470nm的持续性光，在15min时其强度达到高峰，15~ 60min内光强度保持相对稳定。 ②4-MUP　 4-MUP在ALP催化下生成4-甲基伞形酮，在360nm激发光的作用下，发出448nm的荧光，用荧光光度计进行测量。 CAP TODAY调查结果-Mar. 2003 ChemiflexTM – 效应 ARCHITECT? 使用pre-trigger/trigger双重反应来提升和产生光信号 ARCHITECT HBsAg Assay Design 经过最后一步冲洗,磁微粒子上捕捉有免疫复合物 ARCHITECT? 使用pre-trigger/trigger双重反应来提升和产生光信号 Chemiflex …灵活的处理步骤 ARCHITECT分析项目 RSH-灵活的轨道系统 独特的三维立体设计提供连续和灵活运行模式 多色的闪烁灯提示操作员轨道状况,及时进行必要处理 急诊和重检样品优于常规样品的操作,最大限度减少紧急样品检测时间 急诊/优先样品架位 单个5个样本位的ARCHITECT样本架 7个样本架共有35个样本位 插入样本架后系统自动选择优先测试 指示灯直观显示架位情况 常规样品盘位 每个样本盘可放置5个ARCHITECT样本架共25个样本 i2000SR样本盘位数量为4个 样本架运行顺序为从左至右、先进先出 指示灯直观显示盘位情况 RSH--提高工作流程的效率 实验室样品的快速灵活分样是通过RSH和强大的Architect软件实现 自动稀释 自动重检 自动反射 样品架运输速度达0.9m/s加速度 两个样本间的吸样间隔2秒 急诊/优先样品3分钟完成分样 为将来生化和免疫的整合提供必要的条件 试剂通道 25个试剂位置 自动旋转,混匀试剂 试剂包装100和500人份 试剂冰箱