转基因水稻克螟稻2号定量检测用质粒标准分子研制及不确定度评价.pdfVIP

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１２，３２（１０）：１９２４ 转基因水稻克螟稻２号定量检测用质粒标准 分子研制及不确定度评价  李　亮 　臧　超　王　晶　隋志伟　赵正宜　董莲华 （中国计量科学研究院　北京　１０００１３） 摘要　转基因作物的食用安全和环境安全一直受到消费者与各国政府及相关机构人员高度重 视。质粒标准分子是转基因核酸量值的载体，为实现转基因植物核酸量值准确性、可比性和有效 性提供保障。描述了转基因水稻克螟稻２号质粒标准分子（ｐＫＭＤ２）的研制过程，包括质粒构建、 特异性、均匀性、稳定性、可替代性和量值及不确定度评价等方面。量值结果表明ｐＫＭＤ２质粒标 准分子所含两个基因片段比值为１．０３２，不确定度为０．０３２，可以替代基因组作为阳性标准品用于 实验室质控、含量检测及贸易争端等领域。 关键词　转基因水稻　质粒标准分子　不确定度　定量 中图分类号　Ｑ８１９ 　　２０１２年２月，《２０１１年全球生物技术／转基因作物 　　质粒分子具有易于富集，非植物来源，可以高效、 商业化态势》（年报４３）在北京发布。年报作者、ＩＳＡＡＡ 快捷获得无限稳定量的优点，同时也解决了难以获得 主席ＣｌｉｖｅＪａｍｅｓ博士强调：２０１１年转基因作物种植面 ［５］ 植物阳性基因组ＤＮＡ给检测带来的问题 。因此，本 积较２０１０年增长８％，即１２００万公顷；来自全球２９个 ［６］ 文对照一级标准物质技术规范 研制了转Ｂｔ基因水稻 国家的农民中约有 １亿人次种植了转基因作物，且累 克螟稻２号的质粒标准分子，并进行了不确定度评估。 积种植面积超过１２．５亿公顷（超过美国或中国２５％的 国土面积）。Ｃｌｉｖｅ认为转基因作物在战略上的重要性 １　材料与方法 ［１］ 在于为减轻贫困、饥饿和营养不良做出巨大贡献 。 １．１　材料、试剂及仪器 于此同时，转基因作物及产品的安全性受到政府相关 １．１．１　材料　转基因水稻 ＫＭＤ２种子由中国计量学 部门和民众的重视。因此对转基因作物及产品核酸进 院提供； ｐＥＡＳＹＴ３质粒载体购自北京全式金公司。 行定量检测，并对保证检测的准确、可靠和有效性提出 １．１．２　试剂　ＴａｑＭａｎ ＵｎｉｖｅｒｓａｌＭａｓｔｅｒＭｉｘ购自  了更高的要求。 ＡｐｐｌｉｅｄＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓ公司；正反向引物、ＴａｑＭａｎ探针（均 　　克螟稻２号是中国较早获得转Ｂｔ基因成功的水稻 由 Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ上海公司合成）；基因组提取试剂盒 株系，它是利用农杆菌介导法将密码子经过优化的 Ｗｉｚａｒｄ ＭａｇｎｅｔｉｃＤＮＡＰｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎＳｙｓｔｅｍ ｆｏｒＦｏｏｄ  ｃｒｙ１Ａｂ基因导入粳稻品种秀水 １１中，并经过严格筛选