普瑞邦中药材黄曲霉素检测的解决方案.docVIP

普瑞邦中药材黄曲霉素解决方案在田间生长、采收加工、储藏运输等各个环节都会因污染霉菌而发生霉变中药材的种类是影响真菌毒素污染的主要因素,易污染的中药材,在不同的温、湿度条件下均可产生真菌毒素温度和湿度条件也可以影响真菌毒素的增长,如：黄曲霉毒素在不同的温、湿度条件下均可以产生；赭曲霉毒素需要在湿度较高的条件下才能产生。年来,随着中药材在国际市场上的持续升温,其安全性越来越引起人们的关注。真菌毒素残留作为中药材微量外源性有毒有害物质,一般不表现出急性毒性,但通常有较强的蓄积性,致癌、致畸、致突变作用明显,严重影响中药材的安全性。对柏子仁、莲子、使君子、槟榔、麦芽、肉豆蔻、决明子、远志、薏苡仁、大枣、地龙、蜈蚣、水蛭、全蝎等14味药材及其饮片品种项下增加“黄曲霉毒素”检查项目，限度为“黄曲霉毒素B1不得过5 μg/kg；黄曲霉毒素G2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素B2总量不得过10 μg/kg”。2010 版《药典》附录IX V 黄曲霉毒素测定采用高效液相色谱法，另外增补药典描述该法检测建立增加柱后光化学衍生法。 普瑞邦检测方案介绍 仪器分析法 特点 优点 缺点 准确、灵敏、抗干扰性强，国家检测部门的确证方法。 仪器成本高、对操作人员技术要求高、操作复杂、耗时较长。 免疫亲和柱-高效液相色谱法：符合2010版《药典》附录IX V中黄曲霉毒素测定高效液相色谱法，另外增补药典描述该法检测建立增加柱后光化学衍生法。 设备和耗材　　ml，25支/盒 货号：EQ-PUMP-8 一台 用于控制免疫亲和柱过柱流速 9 黄曲霉毒素混标 2μg/ml黄曲霉毒素B1, G1;0.5μg/ml黄曲霉毒素B2;G2 (4/1/4/1)溶于乙腈, 货号：STD#1081 1ml 用于定量分析标准品的配制 2. 样品前处理:普瑞邦为中药材提供不同的处理方案(详细方案请联系普瑞邦，普瑞邦开发了针对多种中药材基质提供优化的处理方案) 3. 免疫亲和柱净化: 富集--洗涤--洗脱--收集全部洗脱液供化学衍生检测用。 4. 化学衍生 为什么使用光化学衍生器？ 由于黄曲霉具有较强的紫外吸收和产生荧光的特性，因此可以进行HPLC-紫外或荧光检测，但是同时黄曲霉毒素中的B1、G1 由于其在含水的流动相中容易产生荧光淬灭，因此在很多的实验中都会采用衍生法测定黄曲霉毒素。衍生的方法也很多：有柱前的，柱后的，在线的，由于在线的柱后光化学衍生有明显的优势，所以现在被增补为药典的检测方法，优势主要在于无需任何化学试剂、对人员无伤害；无需人员直接操作、避免误差; 无需担心衍生液腐蚀检测器。 5. 高效液相色谱分析 （二）酶联免疫法 特点 优点 缺点 灵敏度高、耗时较短、样本处理比较简单、对技术人员要求不高、检测成本低、可同时检测大批量样本。适用于大量样本快速定量筛查。 可能存在一定假阳性率（交叉反应率）。 Pribolab(普瑞邦)推出的PriboFast黄曲霉毒素总量试剂盒具有较高的灵敏度和准确度，适用于大量样本的定量分析。 1. 方法原理 采用直接竞争酶联免疫法，在微孔板上预包被黄曲霉毒素抗原，加入样本（或黄曲霉毒素标准品溶液）及辣根过氧化物酶标记的黄曲霉毒素特异抗体。样本或标准品溶液中的抗原与预包被在板孔上的抗原竞争结合酶标抗体。未结合的酶标抗体在洗涤时被除去。再加入TMB显色液，读取吸光值。样品吸光值与其所含黄曲霉毒素总量成负相关，与标准曲线比较即可得出样品中黄曲霉毒素总量的含量。 2. 设备和试剂配置： 序号 品名 规格及参数 数量 用途 1 PriboFast黄曲霉毒素总量试剂盒 96T，灵敏度：0.1ppb 货号：EKT-011 一盒 定量分析检测 2 PriboSpin离心小柱 25T 一盒 净化样本 3 酶标仪（酶联免疫检测仪） 滤光片：450nm 一台 配套各类色谱仪，霉菌毒素检测用 3. 样本前处理：中药材：粉碎、提取、离心，取上清液加入PriboSpin离心小柱进行净化。 为什么要用PriboSpin离心小柱？中药材的基质复杂，提取时样本液颜色较深，而且不容易去除。有机试剂提取净化方法繁琐，试剂挥发对环境及人体造成危害，且净化效果不稳定。用PriboSpin离心小柱，则只需提取液离心过柱，即可去除提取液中的杂质，方便快捷，净化效果好，且回收率可以达到85%以上。 4. 检测步骤 4.1 免疫反应30min；洗板5次；显色反应30min；终止反应，酶标仪读OD值。 5. 分析结果的表述 用酶标仪判读结果。 （三）免疫金标快速检测法 特点 优点 缺点 操作简单、费用低廉、耗时短、检测快速。适用于样本快速定性初步筛查 存在一定假阳性、数据不方便保存及分析。 Pribolab(普瑞邦)推出的PriboStripTM黄曲霉毒