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第 34卷 第 2期 陕西科技大学学报 Vo1．34No．2 2016年 4月 JournalofShaanxiUniversityofScience＆ Technology Apr．2016 文章编号：1000．5811(2016)02—0139—05 一 种基于 PCR技术快速筛选低能 离子注入重组菌株 的方法 钱卫东 ，周颖欣 ，吴启航 ，蔡长龙 (1．陕西科技大学食品与生物工程学院，陕西 西安 710021；2．西安工业大学 光电工程学院，陕西 西安 710021) 摘 要 ：为拓展基于低能离子注入介导药用植物基因组 DNA转化酵母 、构建能生产天然产物 的酵母重组茵的广泛应用，以 目标产物龙胆苦苷生物合成途径 中的关键酶基 因(GGPPS， MECPS和 MECT)为分子筛选标记 ，以基于低能离子注入 随机转化重组茵 DNA为模板进行 PCR扩增 ，实现对其高通量初筛，利用 HPLC方法对初筛所得菌株发酵产物进行分析检测．结 果，从 1072株转化酵母菌中初筛出12株候选酵母重组菌，经 HPLC复筛后 ，其 中5株重组酵 母茵的发酵产物 中检测出龙胆苦苷．研究表 明，此PCR筛选方法，具有高效、简单、周期短、廉 价 、易于操作等优点，适用于低能离子注入介导基因组DNA大分子随机转化酵母 ，构建能生 物合成天然产物的酵母重组茵的研究中． 关键词 ：PCR快速筛选 ；低能离子注入 ；关键酶 ；重组酵母 茵 中图分类号 ：R285．5 文献标志码 ：A A new methodforrapidscreeningoflow energyion injectedrecombinantstrain byPCR technology QIAN Wei—dong ，ZHOU Ying—xin ，WU Qi—hang ，CAIChang—long (1．SchoolofFoodandBiologicalEngineering，ShaanxiUniversityofScience Technology，Xian710021， China；2．CollegeofOptoelectronicEngineering，XianTechnologicalUniversity，Xian710021，China) Abstract：Toexpandapplicationwidelybasedon low energy ion beam mediatingmedicinal plantstransformedyeastgenomicDNA andconstructingcapableofproducingnaturalprod— uctsinrecombinantyeaststrains．In thispaper，gentiopicrosidebiosyntheticpathway ofkey enzymegenes(GGPPS，MECPSandMECT)actasmolecularscreeningmarker．Recombi— nantstrainsDNA wasamplificatedforPCR，whichtransformedtoobtainasatemplatebased oninjectationlow energyionstoachievehighthroughputscreeningforrecombinantyeast strains．AndthefermentationproductsabtainedbyscreeningstrainwereanalyzedinHPLC． 12candidaterecombinantyeaststrainswerescreenedfrom 1072transformedyeastbyHPLC repeatscreening，and5strainsoffermentationproductwasdetectedgentiopi
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