细胞培及养基础知识.pptVIP

体外培养和细胞培养 寄生体内取出，放在类似于体内的环境的体外环境中，让其生长和发育的方法。包括细胞培养，组织培养和器官培养。 细胞培养：是体外培养：将活体的结构成分或活的个体从体内或体外培养的一种，直接以单个细胞或细胞在体外条件下分裂增生形成的克隆为培养对象。 CRL细胞 大鼠肾小管上皮细胞 神经细胞 斑马鱼原代胚胎细胞 细胞培养的要素 一、无菌操作 二、培养基和血清 三、传代操作 四、冻存和复苏 一、无菌操作 细胞培养的基本设备的处理： 无菌室、无菌操作台、培养箱、显微镜 无菌室的布局和灭菌 1、布局 无菌室布局最重要的一点是设置缓冲间，走道设计为回型结构： 2、无菌室的灭菌： 缓冲间顶部设置一台紫外灯，无菌室顶部设置一台紫外灯，距地面高度不能超过2.5米。 每周用甲醛蒸汽熏蒸灭菌一次。 无菌室内应放置专用拖鞋或使用鞋套。 其它设备的灭菌处理 无菌操作台 培养箱 培养用具：培养瓶、吸管、试剂瓶 二、培养基和血清 常用培养基： MEN、DMEM、1640、199、F12、L15 血清：新生牛血清、胎牛血清 常用添加成分：L－谷氨酰氨，丙酮酸钠，葡萄糖，各种生长因子 培养基配制和除菌 血清的选择、分装和保存 双抗的配制 三、传代操作 体外培养细胞的生长类型： 黏附型 上皮型、成纤维型、游走型、多型型 悬浮型 黏附型细胞传代生长的一般过程： 贴壁 铺展 生长 传代 消化液：胰蛋白酶、EDTA 胰蛋白酶浓度: 0.25%、0.1％、0.05％ EDTA：0.02％、0.03％ 消化液配制的方法 消化传代的方法 四、细胞的冻存和复苏 细胞冻存和复苏的基本原则：慢冻快溶 冻存液的配制： 60％培养基＋30％血清＋10％DMSO 冻存程序： 消化 离心 梯度降温 液氮保存 常见问题分析和对策 污染 化学污染 物理污染 微生物污染 微生物污染 细菌 真菌 支原体 污染处理办法 1、预防 2、抗生素冲击治疗 3、离心 4、建立工作细胞库和冻存细胞库 * * *