第三章及 酶2.pptVIP

第五节 酶活力及其测定 一、酶活力及其测定 酶活力：是指酶催化一定化学反应的能力。 1、酶活力与酶反应速度 ——以单位时间内底物的消耗量或产物的生成量衡量。 二. 活力单位 (U) 与比活力 酶单位（U）： 在一定条件下、一定时间内、将一定量的 底物转化为产物所需的酶量。 如： 每小时催化1克底物 每小时催化1ml某浓度溶液 每分钟催化1ug底物 （1）国际单位（IU） 在标准条件下（25 ℃ ，最适pH和最适底物浓度）一分钟内催化1微摩尔底物转化为产物所需的酶量。 1 IU= 1 ?mol / min ——酶活力单位标准化 （2）Kat（一种新的酶活力国际单位） 在标准条件下（25 ℃ ，最适pH和最适底物浓度）每秒钟催化1摩尔底物转化为产物所需的酶量。 1 Kat =1 mol/s = 60×106 IU ——酶活力单位标准化 酶活力测定实例 ①确定反应条件 20℃、pH=7，底物浓度 6g/l（过量） 加入2mg固体脂肪酶 ②确定活力单位 每小时催化1克底物 1U= 1g/h ③ 测反应初速度 作产物甘油随时间增加的曲线， 量出反应初速度值 ， 换算为脂肪的消耗速度。如 8g/h ④换算活力 8g/h / 1g/h=8U ⑤计算比活力 8U/2mg酶蛋白=4U/mg酶蛋白 第六节 影响酶促反速度的因素 影响酶促反应速度的因素主要包括酶的浓度、底物的浓度、pH、温度、抑制剂和激活剂等。酶促反应动力学遵循化学反应动力学一般规律，但又有其特点。 一、[S]对酶作用的影响 一级反应： v = kc 反应速率与反应物浓度的一次方成正比 零级反应： v = k v 与反应物浓度无关 稳态时ES浓度不变 反应速度 V=k3[ES] ES的生成速度=消耗速度 k1[E][S]=k2[ES] + k3[ES] E的质量平衡方程 [Ef]=[Et] - [ES] a.当[S]很小时 V=V[S]/Km 一级反应 （1）Km的意义 (2) Km是酶的特性常数： 与pH 、温度、离子强度、酶及底物种类有关， 与酶浓度无关，可以鉴定酶。 3、Vmax的意义 Vmax是酶完全被底物饱和时的反应速度，与酶浓度呈正比。 在底物过量、系统不含抑制剂等条件下 酶促反应速度与酶浓度成正比。 最适pH因酶而异，多数酶在7.0左右 上图反映出温度如何影响酶活力？ 引起酶活性降低的因素： 失活作用（ inactivation） —— 变性剂，改变酶的天然构象 去激活作用( deactivation) ——酶的激活剂被去除 抑制作用（inhibition） —— 抑制剂 依据： 能否用透析、超滤等物理方法 除去抑制剂，使酶复活。 1. 不可逆抑制作用 ： 抑制剂与酶必需基团以牢固的共价键相连。 不可逆抑制剂分为：专一性和非专一性两种 很多为剧毒物质 重金属、有机磷、有机汞、有机砷、 氰化物、青霉素，毒鼠强等。 ? H2N-CH-COOH ? CH2 ? SH 如何紧急救治？ 排毒 洗胃、喝鸡蛋清或牛奶 导泄、利尿 血液透析（清除游离状态毒物） 解毒药：解磷定 ④有机汞、有机砷化合物 ——与酶分子中-SH作用； 可通过加入过量巯基化合物解除。 ⑤氰化物、硫化物和CO ——与酶中金属离子形成稳定的络合物 如氰化物与含铁卟啉细胞色素氧化酶结合 2. 可逆抑制作用： 抑制作用可通过透析等方法除去。 原因：非共价键结合 ①竞争性（Competitiv