离体培及养液蔗糖浓度对水稻籽粒蔗糖合成酶活性的影响.pptVIP

离体培养液蔗糖浓度对水稻籽粒蔗糖合成酶活性的影响 前言 蔗糖合成酶的作用： 蔗糖+UDP 果糖＋UDPG 一、试验设置 1.材料与方法 1.1供试材料 　 供试品种为具较高结实率的超级稻两优培九。2004年种植于扬州大学农学院试验田，单本植，田间管理一致，同一般大田栽培。始穗期选择生育进程和长势长相基本一致的主茎进行标记,待稻穗穗颈节露出剑叶鞘1～2ｄ,取样进行穗培养 1.2水稻穗离体培养 （1）不同浓度的蔗糖溶液处理 　　　0、50、100、150、200mM （2）不同时间的蔗糖溶液处理 　　　12、24、48h （3）不同渗透性溶液处理 　　　Mit、Sit、KCl100mM （4）相同浓度的己糖溶液处理 　　　Glu、Fru、Glu+Fru 100mM （5）己糖激酶抑制剂处理 　　　NAG （6）糖类似物溶液处理 　　　Man、3-O-MG 酶的反应介质为：0.2ml 的反应介质中含有50mmol/L Hepes/KOH (pH7.5),5mmol/L Mgcl2 ,3mmol/L UDPG,15mmol/L 果糖，一定量的酶液。酶的活性测定过程参照Roe（1934） 的方法，混合物30℃反应30分钟2mol/L NaOH溶液终止反应，用间苯二酚测定生成的蔗糖的量。酶活力单位为μmol蔗糖/mg蛋白·分钟。 蛋白质含量测定：蛋白质的测定用Bradford(1976)方法，以BSA为标准蛋白。 二、结果与分析 1.不同浓度的蔗糖处理对水稻籽粒中蔗糖合成酶活性的影响 三、讨论 1.对蔗糖合成酶活性的调节主要是蔗糖的效应，且与外源蔗糖的浓度以及内源蔗糖含量都是相关的， 2.蔗糖对蔗糖合成酶活性的调节是可逆的。 3.蔗糖合成酶活性在一定浓度范围内与蔗糖浓度成正效应。 4.外源蔗糖的加入会改变溶液的水势影响蔗糖的运输，为了消除渗透压的影响用相同摩尔浓度的渗透性糖处理证明蔗糖调节不是渗透压的影响。 由于植物中的蔗糖易水解成葡萄糖和果糖，所以对蔗糖特异的信号传导途径的解释较困难。然而，最近的实验表明，因植物存在蔗糖特异的信号传导途径从而影响基因的转录和翻译。例如，蔗糖特异地诱导patatin启动子基因转录首次证明蔗糖能特异地对蔗糖同向转运体的转录和翻译进行调节，而己糖等其他糖则不具备此调节作用。本实验也证明蔗糖合成酶活性是受蔗糖调节的。 关于植物糖感知和信号传导机制的研究取得很大进展，已经从拟南芥中分离出了许多糖响应突变体，糖调控网络及其与多重信号传导途径相互作用的关系图已见雏形，但对不同糖水平下信号传导网络进行详细解释还面临许多困难; 多细胞的光合有机体固有的复杂性；植物在不同发育时期对内源和外源信号表现不同的敏感性，因此幼叶和老叶叶肉细胞可能对糖有不同的反应；高等植物的遗传分析要比单细胞的酵母复杂得多。然而，模式植物拟南芥基因组全序列的测定、突变体的获得和微阵列技术的发展都为植物糖信号传导的遗传分析提供了可行性。 * * 植物学专题讨论之二 导 师： 粱建生 教授 报告人： 王 玉 霞 2005 年12月20日 在无菌室中,先用体积分数为1%次氯酸钠溶液对单茎穗穗颈节以下部分进行表面消毒,在无菌水中剪去距穗颈节11～12ｃｍ以下部分,然后在超净工作台将单茎穗转移到盛有50ｍＬ培养液的玻璃管中,用无菌医用棉封口。每处理重复6次。无菌室用紫外线消毒,进入无菌室的器具、玻璃管、医用棉等都经高温高压或φ=70%酒精消毒。基本培养基成分包括MS无机盐和VB5有机成分，蔗糖浓度依试验处理定。培养玻璃管用铝箔包裹，在暗中培养，穗培室温度24～25℃。 1.3试验处理 2.试验方法 2.1 蔗糖、可溶性总糖的测定 2.2 蔗糖合成酶活性的测定 10ml80%乙醇 80?C水浴30min 冷却 残渣 10ml80%乙醇 80?C水浴30min 2000rpm 离心15min 冷却 2000rpm 离心15min 残渣 10ml80%乙醇 80?C水浴30min 冷却 2000rpm 离心15min 残渣 合并三次上清液 0.1克干样 定容至100ml 蔗糖测定 可溶性总 糖测定 吸0.9ml提取液 吸1.0ml提取液 0.1ml2N NaOH 1.0ml水 沸水浴10min 4ml0.2%蒽酮 冷却 15min沸水浴 1ml0.1%间苯二 酚 3ml10N HCl 80?C水浴60min 冷却 比色OD500 冷却 比色OD620 酶的提取均在0-4℃低温下进行。取20粒-86℃冰箱贮存的籽粒，剥壳去胚后，籽粒加1.5ml提取介质快速研磨12,000rpm 离心15min