莱茵衣藻IFT139蛋白抗原的原核表达纯化及多-天津科技大学学报.PDFVIP

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2017-10-02 发布于天津
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莱茵衣藻IFT139蛋白抗原的原核表达纯化及多-天津科技大学学报

第 31 卷第 6 期天津科技大学学报 Vol. 31 No. 6 2016 年 12 月 Journal of Tianjin University of Science Technology Dec. 2016 DOI:10.13364/j.issn.1672-6510 莱茵衣藻 IFT139 蛋白抗原的原核表达、纯化及多克隆抗体的制备 1 1 1 1, 2 1, 2 田伟，董彬，李镇芳，孟德梅，樊振川 (1. 食品营养与安全教育部重点实验室，天津科技大学食品工程与生物技术学院，天津 300457 ； 2. 天津科技大学新农村发展研究院，天津 300457) 摘要：IFT139 是莱茵衣藻 (Chlamydomonas reinhardtii)纤毛内运输蛋白 IFT 复合物 A 中的一个重要组分．其编码基因的突变、缺失或沉默将会影响纤毛正常的组装和解聚，进而导致纤毛病的产生．为深入研究 IFT139 的作用机制，本实验首先 PCR 获得 ift139 5′端 458 bp 的 EST 片断，成功构建了 pMAL-c2-ift139 与 pET-28a ( ＋)-ift139 重组质粒．然 4 4 后将重组质粒转入大肠杆菌 (E. coli)BL21 (DE3) ，通过 IPTG 诱导表达，分别得到相对分子质量为 6.0 ×10 和 2.5 ×10 的重组 MBP/HIS-IFT139 融合蛋白．进一步将亲和纯化的 MBP-IFT139 融合蛋白 (纯度 95%,以上) ，免疫新西兰大白兔 ﹕ 获得抗血清，间接 ELISA 法测得血清效价为 1 256,000．最后将抗血清依次经 Protein A 和硝酸纤维素膜纯化后，用 Western blot 检测抗体特异性，结果显示所制备抗体能够正确特异性识别莱茵衣藻中的 IFT139 ，从而为 IFT139 作用机制的阐明和纤毛相关疾病的研究奠定了重要基础．关键词：莱茵衣藻；纤毛；IFT139 ；表达纯化；多克隆抗体中图分类号：Q786 文献标志码：A