绵羊犊犃犘-畜牧兽医学报.pdfVIP

畜牧兽医学报 ， （）： ２０１３４４８ １１９８１２０４ 　 犃犮狋犪犞犲狋犲狉犻狀犪狉犻犪犲狋犣狅狅狋犲犮犺狀犻犮犪犛犻狀犻犮犪 ： ／ ｄｏｉ１０．１１８４３ ．ｉｓｓｎ．０３６６６９６４．２０１３．０８．００４ ｊ 绵羊犢犃犘１基因的克隆及其真核表达 载体和突变型载体的构建 １ １ １ ２ ３ ４ ４ ４ ５ 李 达 ，孙 伟 ，苏 锐 ，张占英 ，马月辉 ，张有法 ，陈 玲 ，吴文忠 ，周 洪 　 　 　 　 　 （ 扬州大学动物科学与技术学院，扬州 ； 保定市中华路小学，保定 ； 中国农业科学院北京 １． ２２５００９ ２． ０７１０００ ３． 畜牧兽医研究所，北京 ； 苏州市畜牧兽医站，苏州 ； 徐州市睢宁县林牧渔业局，睢宁 ） １００１９３ ４． ２１５２００ ５． ２２１２００ 摘 要：本研究旨在克隆绵羊犢犃犘１基因ＣＤＳ序列，构建并鉴定其真核表达质粒 ＥＧＦＰＣ１ＹＡＰ１，及其磷酸化位 　 ｐ 点突变体 。本研究利用 技术，从湖羊背最长肌克隆 基因编码区序列， ｐＥＧＦＰＣ１ＹＡＰ１Ｓ４２Ａ ＲＴＰＣＲ 犢犃犘１ ＴＡ 克隆到 载体中，进行测序。利用酶切和 连接酶连接方法，将 基因编码区克隆到 载 ｐＭＤ１９Ｔ Ｔ４ 犢犃犘１ ｐＥＧＦＰＣ１ 体中，构建 ｐＥＧＦＰＣ１ＹＡＰ１真核表达载体，以真核表达载体为模板，构建磷酸化位点突变体 ｐＥＧＦＰＣ１ＹＡＰ１ ，种载体均进行 、 和 双酶切、 单酶切及测序鉴定。结果克隆出 基因的全 Ｓ４２Ａ ２ ＰＣＲ犅犪犿ＨⅠ 犡犺狅Ⅰ 犅犪犿ＨⅠ 犢犃犘１ 长 ｃＤＮＡ序列，获得 ＧｅｎＢａｎｋ登录号ＪＱ７１４２５２，其长度为 １７１２ｂｐ，编码区１２１２ｂｐ，编码 ４０３个氨基酸。重组质 粒 经 、酶切、测序鉴定，证实 基因 区已正确克隆入 表达载体；经测序 ｐＥＧＦＰＣ１ＹＡＰ１ ＰＣＲ 犢犃犘１ ＣＤＳ ｐＥＧＦＰＣ１ 鉴定， 第 位丝氨酸成功突变为丙氨酸。本研究成功克隆绵羊 基因全长 序列，并构建了重组 ＹＡＰ１ ４２ 犢犃犘１ ｃＤＮＡ 真核表达质粒 ｐＥＧＦＰＣ１ＹＡＰ１及磷酸化位点突变体 ｐＥＧＦＰＣ１ＹＡＰ１Ｓ４２Ａ，为进一步研究 ＹＡＰ１蛋白表达及其 生物学活性奠定基础。 关键词：绵羊； 基因；真核表达载体；磷酸化位点突变体 犢犃犘１ 中图分类号： ； 文献标志码： 文章编号： （ ） Ｓ８２６Ｓ８１３．３ Ａ ０３６６６９６４２０１３０８１１９８０７