栎属植物流式细胞术实验体系的建立与优化.PDFVIP

第３９卷　 第 １期 南京林业大学学报（自然科学版） Ｖｏｌ．３９，Ｎｏ．１ ２０１５年１月 Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎａｎｊｉｎｇ Ｆｏｒｅｓｔｒｙ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ （Ｎａｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｅｄｉｔｉｏｎ） Ｊａｎ．，２０１５ － ｄｏｉ：１０．３９６９／ ｊ．ｉｓｓｎ．１０００ ２００６．２０１５．０１．０３０ 栎属植物流式细胞术实验体系的建立与优化 魏高明，方炎明∗ （南京林业大学生物与环境学院，江苏　 南京　 ２１００３７） － 摘要：为建立适于栎属植物的流式细胞核实验体系，分别利用Ｔｒｉｓ ＭｇＣｌ 、Ｇａｌｂｒａｉｔｈｓ、Ｍａｒｉｅｓ 和Ｏｔｔｏｓ 细胞核分 ２ － 离缓冲液对麻栎、栓皮栎、白栎和短柄枹栎制备细胞核悬浮液。 检验发现：Ｔｒｉｓ ＭｇＣｌ 、Ｇａｌｂｒａｉｔｈｓ 缓冲液所制备 ２ 样品未能检测出ＤＮＡ 峰，Ｏｔｔｏｓ缓冲液制备的样品中，除白栎外其他３个样品的测试结果均较差，Ｍａｒｉｅｓ缓冲液 所制备的４个样品测试ＤＮＡ 峰的变异系数（ＣＶ）均大于１０％。 采用正交设计方法对经典Ｍａｒｉｅｓ缓冲液中的β－ － 巯基乙醇和Ｔｗｅｅｎ ２０组分进行了优化，发现麻栎、栓皮栎、白栎和短柄枹栎的最适β 巯基乙醇浓度和Ｔｗｅｅｎ ２０ 体积比分别为４５ ｍｍｏｌ／ Ｌ和２．５％、１５ｍｍｏｌ／ Ｌ和２．０％、６０ｍｍｏｌ／ Ｌ和１．０％及３０ｍｍｏｌ／ Ｌ和１．０％。 运用改进后的 最适Ｍａｒｉｅｓ缓冲液进行流式细胞核测定，４种样品的变异系数均显著下降（在３．５２％～４．８１％之间），表明改进后 的Ｍａｒｉｅｓ缓冲液对４种栎属植物的测试结果准确可信。 关键词：栎属植物；成熟叶片；流式细胞术；细胞核分离缓冲液 － － － 中图分类号：Ｓ７９２．１８　 　 　 　 　 　 　 文献标志码：Ａ 文章编号：１０００ ２００６（２０１５）０１ ０１６７ ０６ Ｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔ ａｎｄ ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ａｎ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ ｓｙｓｔｅｍ ｆｏｒ ｆｌｏｗ ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ ｉｎ Ｑｕｅｒｃｕｓ ＷＥＩ Ｇａｏｍｉｎｇ，ＦＡＮＧ Ｙａｎｍｉｎｇ∗ （Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ ｔｈｅ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ，Ｎａｎｊｉｎｇ Ｆｏｒｅｓｔｒｙ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎａｎｊｉｎｇ ２１００３７，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｉｎｔｈｉｓｒｅｓｅａｒｃｈ，ｉｎｏｒｄｅｒｔｏｅｓｔａｂｌｉｓｈａＦＣＭｓｙｓｔｅｍｉｎＱｕｅｒｃｕｓ，ｆｏｕｒｃｏｍｍｏｎｎｕｃｌｅａｒｉｓｏｌａｔｉｏｎｂｕｆｆｅｒｓ （Ｔｒｉｓ－ ＭｇＣｌ ，Ｇａｌｂｒａｉｔｈｓ