样品保藏方式与时间对海洋底栖细菌及原生生物荧光计数效能.PDFVIP

样品保藏方式与时间对海洋底栖细菌及原生生物荧光计数效能的 影响 1, 2 1 1, 2 1 , , , (1. , 266071; 2. , 100039) 摘要: DAPI 荧光染色技术已广泛应用于浮游细菌及原生生物的定量研究, 但对底栖生物的定量效能 尚缺必要的研究。比较了冷冻和冷藏两种保藏方式以及保存时间对DAPI 荧光计数底栖细菌、蓝细菌、 硅藻、不同粒级自养小鞭毛虫 (PNF) 和异养小鞭毛虫 (HNF) 的影响。对黄海冷水团三个站位表层 2 cm 底栖样品进行的 4 ℃冷藏与−20 ℃冷冻避光保存的比较研究表明, 两种保藏方式下两个站位的所 有研究对象均无显著差异, 但另一站位的 PNF (2~5 μm 和 5~10 μm) 的冷藏保存显著优于冷冻保存。 对选取的另外两个站位 (0~2 cm 和 2~5 cm 分层) 的样品经 1 个月和 4 个月冷藏保存后的分析表 明, 对于底栖细菌、蓝细菌、PNF (5~10 μm) 、PNF ( ＞10 μm) 、HNF ( ＞10 μm) 和硅藻在保存 1 个月 和 4 个月后的计数没有显著差异, 而对于 PNF (2~5 μm) 、HNF (2~5 μm) 、HNF (5~10 μm) 保存 4 个 月的数量明显低于保存 1 个月的样品, 如其中一个站位的 0~2 cm 分层的 PNF (2~5 μm) 丰度减少 了 47.4%, 2~5 cm 分层的丰度减少了 59.6%, HNF (2~5 μm) 和 HNF (5~10 μm) 经 4 个月后丰度降 为 0 。本研究表明, 对底栖细菌、蓝细菌以及原生生物的定量计数可因样品、保藏方式及保存时间的 不同而产生差异, 因此对于底栖样品短期内宜采用避光、冷藏保存, 并在带回实验室后尽快分析。 关键词: 冷冻; 冷藏; 保存时间; 底栖细菌; 原生生物; DAPI 荧光计数 中图分类号: Q935 文献标识码: A 文章编号: 1000-3096(2010)05-0013-08 DAPI (4′,6-diamidino-2-phenylindole, 4′,6-- 4 ℃ 24 Hyun 2-) , [8], [3, 9] DNA Turley A-T DAPI-DNA , , 40 (365nm) 39%, DAPI DAPI , 70 d , Pomroy[10] Lugol’s , [1] , 4 , , 10 , ,