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非标记生物物理技术在分子相互作用 领域的应用 通用电气医疗集团生命科学部 应用工程师韩佩韦博士 Peiwei.han@ 400-810-9118 2014.6.30 内容简介 一、非标记生物物理技术概述 二、Biacore原理及在蛋白互作和药筛中的应用 三、微量热技术简介 四、QA 2 / GE Title or job number / 2014-06-30 生命过程由无数个分子相互作用组成 生物分子互作网络一角 HIV病毒入侵宿主直至成熟的全过程 3 / GE Title or job number / 2014-06-30 常见的分子相互作用例子 1. 配体与细胞表面受体的相互作用； 2. 转录因子对核酸关键序列（如启动子、增强子等）的调节； 3. 低分子量的“第二信使” 与生物大分子之间的相互作用； 4. 蛋白质复合体多个亚基之间的组装与调节； 5. 免疫反应中T cell 与病原体表面抗原之间的识别； 6. 酶分子与其激活剂或者抑制剂之间的相互作用； 7. 生物分子在质膜与核膜之间的转位及调节； … … 4 / GE Title or job number / 2014-06-30 常用的分子互作技术 对于涉及蛋白质相互作用的研究 1. 酵母双杂交 2. 酶联免疫吸附分析（ELISA ） 3. 荧光共振能量转移（FRET ） 4. 免疫共沉淀（Co-IP ） 5. 免疫印记（Western, Far-Western ） 6. 质谱技术（Mass Spectrometry ） 对于涉及核酸相互作用的研究 1. EMSA 2. ChIP （染色体免疫沉淀法，Co-IP的类似技术） 5 / GE Title or job number / 2014-06-30 目前分子互作技术的特征 1. 终点技术（End-point Tech ） 酵母双杂，ELISA，Co-IP，ChIP ，Western ，MassSpec. 2. 需要标记（Require Labeling ） 酵母双杂，ELISA，FRET 3. 检测强亲和力的相互作用 ELISA，Co-IP，ChIP ，Western ，MassSpec，EMSA 3. 耗时费力（Laborious ） ELISA，Western ，EMSA 4. 非活性或半活性互作（Inactive OR Semi-active Tech ） ELISA，Western ，MassSpec，EMSA 5. 信息量较少 有/无信息，以及ELISA 的亲和力信息 6 / GE Title or job number / 2014-06-30 非标记分子互作分析平台 （表面等离子共振及微量热技术） 7 / GE Title or job number / 2014-06-30 亲和力(Affinity, KD) 弱结合 中等强度 强结合 mM µM nM